[发明专利]一种可高通量检测东海原甲藻自然水样的试剂盒

权利要求书

1.一种可高通量检测东海原甲藻自然水样的试剂盒，其特征在于，其组成为：（1） 试剂A为自然样品核酸粗提试剂，其组成为：2% (m/v) CTAB, 0.5%(v/v) β-mercaptoethanol, 1.4 M NaCl, 20 mM EDTA, 100 mM Tris-Cl, 10 U RNase Inhibitor；

（2） 试剂B为5×NASBA Buffer，其组成为0.2 M Tris-HCl, 60 mM MgCl₂, 0.35 M KCl₂, 25 mM DTT, 20 mM dNTP；

（3）试剂C为NTP（10 mM each)；

（4）试剂D为5×Primer mix，其组成为：75% DMSO, 1 μM NASBA-P1, 1 μM NASBA-P2, 25 mM DTT, 20 mM dNTP；

（5）试剂E为4×Enzyme mix，其组成为：1.5 M山梨醇, 0.42 mg/ml BSA, 16 U/ml RNase H, 6400 U/ml T7 RNA Polymerase, 1280 U/ml RT-M-MLV, 4000 U/ml RNA inhibitor；

（6）试剂F为RNA变性剂，其组成为：1.5 M NaCl，0.15 M二水柠檬酸三钠，pH 7.0, 0.15 M 甲醛；

（7）试剂G为杂交液，其组成为：1% Blocking Reagent II，0.75 M NaCl，0.075二水柠檬酸三钠，50 μg/mlml 鲑精DNA；

（8）试剂H为地高辛标（DIG）标记探针，2 ng/μl，探针序列： 5’-GCACGGCATACCTTCTAAGAG-3’；

（9）试剂I为Buffer II，其组成为：1% Blocking Reagent II, 0.1 M Tris, 0.15 NaCl, pH 7.5；

（10）试剂J为碱性磷酸酶标记的DIG抗体(AP-抗DIG)；

（11）试剂K为显色剂，其组成为2.81% NBT，2.19% BCIP，70%二甲基甲酰胺；

（12）对照模板：

（12.1）阳性对照检测样品：东海原甲藻的总RNA；

（12.2）阴性对照检测样品：赤潮异湾藻的总RNA。