[发明专利]一种葡萄糖响应性胰岛素自调节释放载体的制备方法

权利要求书

1.一种葡萄糖响应性胰岛素自调节释放微凝胶载体的制备方法，所述方法包括：

1）将葡萄糖氧乙基丙烯酸酯改性壳聚糖CS-GEA溶解于去离子水中，CS-GEA初始浓度为10~100mg/mL，溶解后的溶液与活化后的Con A溶液混合，CS-GEA与Con A的质量比为1~10:1，搅拌2~5h；

2）将环己烷与乳化稳定剂吐温85混合，环己烷的体积毫升数与吐温85的质量克数之比为50~100:1，以500~800 rpm转速于室温下搅拌0.5~2h；

3）将1体积份数的步骤1）中所得的搅拌好的混合溶液用注射器针头滴加到40～80体积份数的步骤2）的混合液中并保持与步骤2）相同转速继续搅拌0.5~2h得到乳白色分散液；

4）将交联剂京尼平水溶液滴加到步骤3）得到的分散液中，保持反应36~48h得到硬化的微凝胶颗粒；

5）反应结束后静置1~2h，去除上层油相，下层用沉淀溶剂沉淀，离心、水洗3-5次，经冷冻干燥即得葡萄糖响应性胰岛素自调节释放微凝胶载体。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的萄萄糖氧乙基丙烯酸酯改性壳聚糖CS-GEA由如下方法制备得到：将分子量为50~200kDa、脱乙酰度为86~90%的壳聚糖溶于体积百分数为0.5~2%的醋酸水溶液中，然后滴加葡萄糖氧乙基丙烯酸酯水溶液，壳聚糖醋酸水溶液浓度为10~25mg/mL，葡萄糖氧乙基丙烯酸酯水溶液浓度为0.2~0.8mol/L，加入的葡萄糖氧乙基丙烯酸酯与壳聚糖分子中氨基的摩尔比为0.8~1.2:1，40~60 ^oC下搅拌反应24~48h，反应结束后使用过量NaHCO₃调节反应液的pH值至8-9，然后使用溶剂进行沉淀，过滤收集固体组分，重新用去离子水溶解后使用截留分子量8~15kDa的透析膜在去离子水中透析4~7天，经冷冻干燥得到取代度为1.5~3的CS-GEA。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述沉淀溶剂为甲醇，乙醇，丙酮，异丙醇或二甲基亚砜。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的Con A活化溶液由如下方法得到：将Con A溶于含有0.1 mol/L KCl, 0.1 mmol/L CaCl₂, 0.1 mmol/L MnCl₂ 的pH 7.0~7.8 的缓冲溶液中，Con A初始浓度为1~10 mg/mL，缓冲溶液为磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液或磷酸盐-柠檬酸缓冲液，静置6h以上。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的交联剂京尼平的初始浓度为1~10 mg/mL，京尼平质量为CS-GEA与Con A质量总和的5%~12%。