[发明专利]一种规模化繁殖无毒烟蚜的方法

说明书

技术领域：

本发明属于植物保护领域蚜虫的生物防治，特别是一种规模化繁殖无毒烟蚜的方法。

背景技术:

烟蚜茧蜂（Aphidius gifuensis）是专门寄生蚜虫的一种内寄生蜂，是烟田烟蚜的重要寄生性天敌。烟蚜茧蜂在蚜虫生物防治方面利用广泛。蚜茧蜂防治蚜虫的主要步骤有：种植植物，在植物上饲养蚜虫，利用植物上饲养的蚜虫，饲养蚜茧蜂。通过田间人工释放饲养的蚜茧蜂，寄生田间作物上的蚜虫，达到防治蚜虫的目的。蚜茧蜂饲养包括两个主要阶段：1）种蚜和种蜂的越冬；2）商品蚜茧蜂的生产和释放阶段。在规模化饲养蚜茧蜂的小棚或大棚网室或温室中，需要常年种植蚜虫繁殖植物，需要频繁接触植物。

蚜虫与蚜虫传播的病毒病。桃蚜、棉蚜、萝卜蚜、甘蓝蚜是传播烟草病毒病的主要介体。主要通过蚜传的病毒有PVY、黄瓜花叶病毒（CMV）等。蚜虫传播上述病毒为非持久性传播，在毒源物上取食几秒至几分钟即可获毒，获毒后不需要潜伏期即可传毒，持毒时间较短，一般不超过一小时，脱皮后即丧失传毒能力。蚜虫传毒是烟草苗期和大田移栽期PVY和CMV初侵染的来源之一，也是病毒在田块内和田块间的主要传播途径之一。

蚜虫的繁殖寄主常用为烟草或萝卜。蚜虫的规模化饲养，要求繁殖寄主适应于高密度种植，叶面积较大，适应蚜虫快速大量繁殖。在生产上首选为商业化种植的烟草品种或萝卜品种。目前采用烟草品种或萝卜品种，如国内专利或文献报道的烟草品种K326、烟草品种云烟202等，易感TMV和/或PVY病毒。烟苗或萝卜苗感染病毒病之后，表现生长缓慢，植株提前衰老，显著降低蚜虫的繁殖数量。更为重要的是，在感病的寄主上饲养的蚜虫可携带并传播PVY。由于蚜虫和蚜茧蜂个体很小但群体数量很大，繁殖蚜茧蜂的蚜虫一旦携带病毒，现有技术不能保证在释放蚜茧蜂时，不会释放混杂的带毒蚜虫。因为在蚜茧蜂中难以避免混杂有少量的有翅蚜、或有少量未被蚜茧蜂寄生的若蚜或寄生早期的若蚜。这些有翅蚜、若蚜、寄生蚜随蚜茧蜂释放到田间之后，可能成为田间TMV和PVY的初侵染源之一携带的病毒可能感染田间作物。

降低释放蚜茧蜂伴随的蚜虫和僵蚜载体携带植物病毒风险的策略主要有：1）降低蚜茧蜂中混杂的蚜虫比例。技术手段包括通过改进蚜茧蜂和蚜虫的分选方法、提高若蚜的寄生比例；2）严格隔离和消毒饲养棚体、人员和植物寄主，减少饲养棚体内的植物病毒初侵染源和传播途径。蚜茧蜂规模化生产主要采用以上两种策略。但存在成本较高、步骤繁琐、落实难度较大、难以达到高效等问题。主要问题体现在以下几方面：1）蚜茧蜂和蚜虫的个体细小但群体数量巨大，难以分选，蚜茧蜂成蜂和有翅蚜尚能彻底分开的分选方法。2）由于长期进化的结果，规模化的饲养棚中，无法达到百分之百的若蚜寄生率。3）常见的植物病毒病防控难度大。在操作频繁、重复使用的网室或温室内，TMV和PVY等危害重的植物病毒，具有初侵染来源多、易于传播、传播速度快、隐症带毒、药剂防治效果差等特点。一旦某个棚体带毒，彻底消灭成本高、难度大。

发明内容：

针对现有蚜茧蜂生物防治中繁殖蚜虫的不足，本发明的目的在于提供一种规模化繁殖无毒烟蚜的方法，该方法高效经济、能有效降低蚜虫携带病毒。本发明目的通过以下技术方案予以实现：

采用高抗烟草花叶病毒（TMV）和马铃薯Y病毒（PVY）烟草材料作为蚜虫的繁殖寄主；通过育苗或盆栽或移栽后，在网室或温室内人工繁殖蚜虫，选择双抗且蚜虫繁殖效率高的株系，用于繁殖无毒蚜虫。

所述的高抗TMV和PVY的烟草材料，采用常规杂交育种方法获得，同时携带对TMV免疫的N基因和高抗PVY的va基因位点；对TMV和PVY的抗性到达人工接种病毒后，接种植株不表现花叶病症状、且非接种叶片病毒酶联免疫检测为阴性的水平。

通过常规杂交育种的方法，将携带对TMV免疫的N基因烟草材料与携带对PVY高抗的va基因烟草材料杂交，转育整合成双抗TMV和PVY的烟草材料；所述携带对TMV免疫的N基因烟草材料为Coker176、CV87、SC71、SC72或Coker86等种质资源之一；所述的携带对PVY高抗的va基因位点的烟草材料为VAM、TN86、TN90、NC55或VSCR等种质资源之一。