[发明专利]对细胞的上皮性维持起作用的物质的筛选方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种以球状体(spheroid)的形态的变化为指标来筛选对细胞的上皮性维持起作用的物质的方法。

背景技术

上皮-间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition：EMT)是指细胞无法维持作为上皮的特性而获得作为间质系的特性的现象。近年来，报道了上皮-间质转化参与癌细胞的浸润、转移和/或组织的重塑(remodeling)、纤维化等。因此，人们期待将对细胞的上皮性维持起作用的物质、即阻碍上皮-间质转化的物质、或诱导出作为上皮-间质转化的相反现象的间质-上皮转化(Mesenchymal-Epithelial Transition：MET)的物质开发为癌或纤维症等的治疗药。

以往，作为筛选对细胞的上皮性维持起作用的物质的方法，存在有：使被实验物质接触被诱导进行了上皮-间质转化的细胞，以表示上皮-间质转化状态的生物标记物量的变化作为指标来进行评价的方法(例如参照专利文献1)。

现有技术文献

专利文献1：国际公开号WO2009/111067

发明内容

发明要解决的课题

但是，以生物标记物量为指标的筛选方法的检测耗费工夫和成本。因此，该方法难以适用于制药初期阶段的筛选那样的必须快速评价大量样品的筛选。另外，存在有低浓度的生物标记物的检测困难因而缺乏可信度这样的问题。

因此，本发明的目的在于提供一种可迅速且以低成本实施、并且可取得可信度高的数据的对细胞的上皮性维持起作用的物质的筛选方法。

用于解决课题的手段

本发明人等发现了，在作为上皮细胞所表达的细胞间粘接因子的E-cadherin的表达量与在规定的培养基材上培养的细胞所表现的行为之间存在有相关关系。即发现了，如果因上皮-间质转化而使得E-cadherin的表达降低而无法维持细胞的上皮性时，则该细胞获得高的迁移能力而变为在规定的培养基材上容易形成球状体的状态，并且形成的球状体根据E-cadherin的表达量而呈现不同的形态。然后，作为以球状体形态的变化为指标的筛选方法，完成了本发明。

本发明的要旨如下所述。

本发明的对细胞的上皮性维持起作用的物质的筛选方法的特征在于，包含如下工序：(a)在可形成球状体的培养基材上培养细胞的工序，(b)使所述细胞与被实验物质接触的工序，(c)以球状体的形态的变化作为指标来评价被实验物质对于所述细胞的上皮性维持所产生的效果的工序。

在此情况下，所述工序(c)可通过测定规定尺寸的球状体数量来评价。

另外，所述工序(c)可通过使用可检测球状体内的低氧区域的试剂来评价。

所述工序(a)可在具有作为细胞粘接面而起作用的规定的凹凸结构的培养基材上进行。

在此情况下，所述凹凸结构优选为通过将包含规定的平面形状的单元结构规则地进行多个排列而得到的凹凸结构。

另外，凹凸结构可以是通过将单元结构间的宽度为3μm以下、平面方向的形状为多边形并且最小内径为3μm以下的单元结构规则地进行多个排列而形成的凹凸结构。

发明效果

本发明的筛选方法由于以球状体的形态的变化作为指标来进行评价，因而可迅速且以低成本筛选目标物质。另外，由于是利用了可认为相比于单层细胞而言更反映了接近生物体内的状态的球状体的方法，因而可有效地进行筛选。进一步，由于可同时地捕捉多个指标来评价，因此可获得可信度高的筛选结果。

附图说明

图1是表示本发明方法中使用的培养基材的凹凸结构的俯视图。

图2是表示球状体的形态的照片。

图3是表示E-cadherin的表达量的照片以及图表。

图4是表示上皮-间质转化阻碍剂对球状体的形态所产生的效果的显微镜照片。

图5是表示低氧区域检测试剂的信号强度的图表。

图6是表示E-cadherin基因的表达量的图表。

图7是表示N-cadherin基因的表达量的图表。

图8是表示Vimentin基因的表达量的图表。

图9是表示ZEB1基因的表达量的图表。

附图标记说明：

1  单元结构

2  线

具体实施方式