[发明专利]抗第三方中央型记忆T细胞、其产生方法以及其在移植和疾病治疗中的应用

权利要求书

1.一种产生包含具有中央型记忆T淋巴细胞(Tcm)表型的抗第三方细胞的细胞的分离群体的方法，所述细胞是耐受性诱导细胞和/或赋有抗疾病活性，并且在移植之后能够归巢至淋巴结，所述方法包括：

(a)在IL-21的存在下，使外周血单核细胞(PBMC)与一种或多种第三方抗原接触，以便富集抗原反应性细胞；和

(b)在无抗原的环境中，在IL-21、IL-15和IL-7的存在下，培养获自步骤(a)的所述细胞，以便允许增殖包含所述中央型记忆T淋巴细胞(Tcm)表型的细胞，从而产生所述细胞的分离群体。

2.根据权利要求1所述的方法，进一步包括：在步骤(a)之前，从所述PBMC中耗尽非贴壁细胞。

3.根据权利要求1或2所述的方法，进一步包括：在步骤(a)之前，从所述PBMC中耗尽CD4+和/或CD56+细胞。

4.根据权利要求1、2或3所述的方法，进一步包括：在步骤(a)之前，从所述PBMC中选择CD45RA+和/或CD45RO-细胞。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述PBMC包含CD8+T细胞。

6.根据权利要求1所述的方法，进一步包括：在步骤(a)之后且在步骤(b)之前，在IL-21、IL-15和IL-7的存在下，用一种或多种第三方抗原培养获自步骤(a)的所述细胞。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述一种或多种第三方抗原包括树突状细胞。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述树突状细胞是经辐射的树突状细胞。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述一种或多种第三方抗原选自由以下组成的组：第三方细胞、细胞抗原、病毒抗原、细菌抗原、蛋白质提取物、纯化的蛋白质以及由自体呈递细胞、非自体呈递细胞呈递的或在人工载体或人工抗原呈递细胞上呈递的合成肽。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述第三方细胞是选自由以下组成的组的刺激细胞：纯化自外周血淋巴细胞、脾脏或淋巴结、细胞因子动员的PBL、体外扩增的抗原呈递细胞(APC)、体外扩增的树突状细胞和人工抗原呈递细胞的细胞。

11.一种产生包含具有中央型记忆T淋巴细胞(Tcm)表型的抗第三方细胞的细胞的分离群体的方法，所述细胞是耐受性诱导细胞和/或赋有移植物抗白血病(GVL)活性，并且在移植之后能够归巢至淋巴结，所述方法包括：

(a)用能够耗尽CD4+和/或CD56+细胞的试剂处理非贴壁外周血单核细胞(PBMC)，以便获得CD8+T细胞；

(b)在IL-21的存在下，使所述CD8+T细胞与第三方树突状细胞接触12小时至5天，以便允许富集抗原反应性细胞；

(c)在IL-21、IL-15和IL-7的存在下，用所述第三方树突状细胞培养获自步骤(b)的细胞12小时至3天；和

(d)在无抗原的环境中，在IL-21、IL-15和IL-7的存在下，培养由步骤(c)获得的所述细胞5至20天，以便允许增殖包含所述中央型记忆T淋巴细胞(Tcm)表型的细胞，从而产生所述细胞的分离群体。

12.一种产生包含具有中央型记忆T淋巴细胞(Tcm)表型的抗第三细胞的细胞的分离群体的方法，所述细胞赋有抗疾病活性并且在移植之后能够归巢至淋巴结，所述方法包括：

(a)用能够耗尽CD4+和/或CD56+细胞的试剂处理非贴壁外周血单核细胞(PBMC)，以便获得CD8+T细胞；

(b)在IL-21的存在下，使所述CD8+T细胞与非同源的树突状细胞接触12小时至5天，以便允许富集抗原反应性细胞；

(c)在IL-21、IL-15和IL-7的存在下用所述非同源的树突状细胞培养获自步骤(b)的所述细胞12小时至3天；和

(d)在无抗原的环境中，在IL-21、IL-15和IL-7的存在下，培养获自步骤(c)的所述细胞5至20天，以便允许增殖包含所述中央型记忆T淋巴细胞(Tcm)表型的细胞，从而产生所述细胞的分离群体。

13.根据权利要求11或12所述的方法，进一步包括在步骤(a)之后且在步骤(b)之前从所述PBMC中选择CD45RA+和/或CD45RO-细胞。