[发明专利]突变型β葡糖苷酶、生物质分解用酶组合物和糖液的制造方法

权利要求书

1.突变型β葡糖苷酶，其特征在于，在各单体之间形成氢键或离子键的氨基酸的位置，具有使β葡糖苷酶的4聚体形成不稳定化的突变，并且，该突变型β葡糖苷酶具有与野生型相比同等或更高的纤维二糖分解活性。

2.根据权利要求1所述的突变型β葡糖苷酶，具有与序列号1的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列，在该有90％以上的序列同一性的氨基酸序列中，包含与选自序列号1的氨基酸序列的第39位的谷氨酸、第169位的天冬氨酸、第170位的精氨酸、第220位的精氨酸、第227位的酪氨酸和第330位的谷氨酸中的至少3个以上的氨基酸相当的氨基酸的突变。

3.根据权利要求1或2所述的突变型β葡糖苷酶，具有与序列号1的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列，在该有90％以上的序列同一性的氨基酸序列中，包含与选自序列号1的氨基酸序列的第39位的谷氨酸、第169位的天冬氨酸、第170位的精氨酸、第220位的精氨酸、第227位的酪氨酸和第330位的谷氨酸中的至少3个以上的氨基酸相当的氨基酸向具有中性侧链的氨基酸的置换。

4.根据权利要求1～3的任一项所述的突变型β葡糖苷酶，具有与序列号1的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列，在该有90％以上的序列同一性的氨基酸序列中，包含与序列号1的氨基酸序列的第170位的精氨酸、第220位的精氨酸和第227位的酪氨酸相当的氨基酸向具有中性侧链的氨基酸的置换。

5.根据权利要求3或4所述的突变型β葡糖苷酶，具有中性侧链的氨基酸从丙氨酸、苯丙氨酸和甘氨酸中选择。

6.根据权利要求1～5的任一项所述的突变型β葡糖苷酶，具有与序列号1的氨基酸序列有90％以上的序列同一性的氨基酸序列，在该有90％以上的序列同一性的氨基酸序列中，包含与序列号1的氨基酸序列的第170位的精氨酸相当的氨基酸向丙氨酸的置换、与序列号1的氨基酸序列的第220位的精氨酸相当的氨基酸向丙氨酸的置换和与序列号1的氨基酸序列的第227位的酪氨酸相当的氨基酸向苯丙氨酸的置换。

7.根据权利要求1～6的任一项所述的突变型β葡糖苷酶，包含序列号14所示的氨基酸序列。

8.根据权利要求1～7的任一项所述的突变型β葡糖苷酶，进一步包含与选自序列号1的氨基酸序列的第440位的亮氨酸、第448位的精氨酸、第449位的谷氨酸、第459位的谷氨酸中的1个以上的氨基酸相当的氨基酸的突变。

9.根据权利要求8所述的突变型β葡糖苷酶，包含选自与序列号1的氨基酸序列的第448位的精氨酸相当的氨基酸向具有中性侧链或酸性侧链的氨基酸的置换、与序列号1的氨基酸序列的第449位的谷氨酸相当的氨基酸向具有中性侧链或碱性侧链的氨基酸的置换和与序列号1的氨基酸序列的第459位的谷氨酸相当的氨基酸向具有中性侧链或碱性侧链的氨基酸的置换中的1个以上的置换。

10.根据权利要求8或9所述的突变型β葡糖苷酶，包含序列号35～38的任一者所示的氨基酸序列。

11.DNA，编码权利要求1～10的任一项所述的突变型β葡糖苷酶。

12.根据权利要求11所述的DNA，包含序列号20、序列号31～34的任一者所示的碱基序列。

13.表达载体，包含权利要求11或12所述的DNA。

14.转化细胞，通过使用了权利要求13所述的表达载体的转化而制作。

15.生物质分解用酶组合物，包含权利要求1～10的任一项所述的突变型β葡糖苷酶或权利要求14所述的转化细胞的处理物。

16.从来源于纤维素的生物质制造糖液的方法，包含将含纤维素的生物质使用权利要求15所述的生物质分解用酶组合物进行水解的步骤。