[发明专利]表达重组DSBC的细菌宿主菌株

权利要求书

1.一种重组革兰氏阴性细菌细胞，其包含:

a)包含编码DsbC的重组多核苷酸的表达载体；和

b)一个或多个编码特异性结合CD154的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸。

2.权利要求1的革兰氏阴性细菌细胞，其中DsbC在N末端或C末端上包含组氨酸-标签。

3.权利要求1或2的革兰氏阴性细菌细胞，其中所述表达载体包含具有SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:51中所示的序列的多核苷酸。

4.权利要求1至3的任一项的革兰氏阴性细菌细胞，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含3个CDR，所述CDR对于CDRH1具有SEQ ID NO:1中所示的序列、对于CDRH2具有SEQ ID NO:2中所示的序列和对于CDRH3具有SEQ ID NO:3中所示的序列，以及所述轻链可变结构域包含3个CDR，所述CDR对于CDRL1具有SEQ ID NO:4中所示的序列，对于CDRL2具有SEQ ID NO:5中所示的序列和对于CDRL3具有SEQ ID NO:6所示的序列。

5.权利要求4的革兰氏阴性细菌细胞，其中所述一个或多个多核苷酸编码抗体，所述抗体包含SEQ ID NO:8中所示的轻链可变区序列和SEQ ID NO:10中所示的重链可变区。

6.权利要求1至5的任一项的革兰氏阴性细菌细胞，其中所述抗体是Fab或Fab’片段。

7.权利要求6的革兰氏阴性细菌细胞，其中所述Fab或Fab’片段包含具有SEQ ID NO:12中所示的序列的轻链和具有SEQ ID NO:14或16中所示的序列的重链。

8.权利要求1至7的任一项的革兰氏阴性细菌细胞，其中所述革兰氏阴性细菌细胞包含第一表达载体和第二表达载体，所述第一表达载体包含编码DsbC的重组多核苷酸，并且所述第二表达载体包含一个或多个编码特异性结合CD154的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸。

9.权利要求1至7的任一项的革兰氏阴性细菌细胞，其中包含编码DsbC的重组多核苷酸的表达载体额外地包含一个或多个编码特异性结合CD154的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸。

10.权利要求1至9的任一项的革兰氏阴性细菌细胞，其中所述细胞相较于野生型细胞具有减小的Tsp蛋白活性，并且包含编码改变的spr蛋白的重组多核苷酸。

11.权利要求10的革兰氏阴性细菌细胞，其中编码Tsp的多核苷酸包含敲除突变，并且编码改变的spr蛋白的多核苷酸包含影响氨基酸C94的突变。

12.权利要求11的革兰氏阴性细菌细胞，其中编码改变的spr蛋白的多核苷酸的突变导致，位置94上的氨基酸半胱氨酸改变成丙氨酸(C94A)。

13.权利要求1至12的任一项的革兰氏阴性细菌细胞，其中除了编码DsbC的重组多核苷酸和一个或多个编码特异性结合CD154的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸外，所述细胞对于野生型细菌细胞是等基因的。

14.权利要求1至13的任一项的革兰氏阴性细菌细胞，其中所述细胞是大肠杆菌。

15.一种表达载体，其包含编码DsbC的重组多核苷酸和用于产生特异性结合CD154的抗体或其抗原结合片段的双顺反子信息，其中上游顺反子包含编码抗体轻链的DNA并且下游顺反子包含编码对应重链的DNA，其特征在于所述双顺反子信息包含选自IGS1(SEQ ID NO:33)、IGS2(SEQ ID NO:34)、IGS3(SEQ ID NO:35)和IGS4(SEQ ID NO:36)的序列。

16.权利要求15的表达载体，其中特异性结合CD154的抗体或其抗原结合片段如权利要求4至7的任一项中所定义。

17.权利要求15或16的表达载体，其中所述DsbC如权利要求2或3中所定义。

18.权利要求1至14的任一项的革兰氏阴性细菌细胞，其包含权利要求15至17的任一项中定义的表达载体。