[发明专利]对应于转基因事件KK179-2的苜蓿植物和种子及其检测方法

说明书

本发明提供了转基因苜蓿事件KK179‑2。本发明还提供了与所述事件相关的细胞、植物部分、种子、植物、商品以及对于所述事件是独特的并且通过将转基因DNA插入苜蓿植物的基因组来产生的DNA分子。本发明进一步提供了用于检测所述苜蓿事件核苷酸序列在样本中的存在的方法，用于检测诊断所述苜蓿事件的存在的核苷酸序列的探针和引物。

相关申请的交叉引用

本申请根据35U.S.C.§119(e)有权要求于2011年6月30日提交的美国临时专利申请号61/503,373和2012年6月26日提交的美国临时专利申请号61/664,359的优先权，所述美国临时专利申请的公开内容通过引用整体并入本文。

序列表的并入

称为“57978_seq_listing.txt”的序列表为10,564字节(在MS-WINDOWS中测量)，以电子形式提交，创建于2012年5月1日，并且通过引用并入本文。

发明领域

本发明涉及苜蓿转基因事件KK179-2。本发明还提供了与所述事件相关的细胞、植物部分、种子、植物、商品，以及对于事件是独特的并且通过将转基因DNA插入苜蓿植物的基因组来产生的DNA分子。本发明进一步提供了用于检测所述苜蓿事件核苷酸序列在样本中的存在的方法，用于检测诊断所述苜蓿事件的存在的核苷酸序列的探针和引物。

发明背景

苜蓿(Medicago sativa)是世界上栽培最多的豆类作物，其中美国是头号苜蓿生产国。生物技术的方法已应用于苜蓿以改善产品的农艺性状和质量。一种这样的农艺性状是增加的木质素含量。

木质素是第二丰富的陆地生物聚合物且占有机碳的30％。木质素对于细胞壁的结构完整性是至关重要的并且其赋予茎硬度和强度。木质素含量与奶牛的饲料消化率逆相关。可通过表达能够提供木质素的减少并且同时提供增加的苜蓿消化率的RNA抑制构建体来在转基因植物中获得此类减少。已知外源基因或抑制分子在植物中的表达受很多因素影响，这些因素例如使用的调控元件、转基因插入物的染色体定位、靠近转基因插入位点的任何内源调控元件的接近度(proximity)、以及环境因素例如光和温度。例如，已观察到在类似产生的事件之间在转基因抑制的总体水平上或转基因抑制的空间或时间模式上存在变化。为此原因，通常必需筛选数百个独立转化事件以最终鉴定对于商业农业目的有用的一个事件。一旦被鉴定为具有期望的抑制表型、分子特征和改善的性状，那么可使用植物育种方法将这样的事件用于将该改善的性状渗入其他遗传背景。所得的后代可含有转基因事件，并且因此可具有原始转化体的该性状的相同特征。这可用于产生许多不同的包含改良的性状并且经适当地改造适合于特定地方生长条件的作物品种。

能够检测特定植物的转基因/基因组DNA的存在以便确定有性杂交的后代是否含有所关注的转基因/基因组DNA将是有利的。此外，用于检测特定植物的方法当遵守需要上市前批准和标记来源于转基因作物植物的食品的规程时将是有用的。

抑制元素的存在或不存在可通过任何公知的核酸检测方法例如聚合酶链式反应(PCR)或使用核酸探针的DNA杂交来检测。这些检测方法一般集中于常用的遗传元件例如启动子、终止子、标记基因等。这样，此类方法可能不用于区分不同转化事件，特别是使用相同DNA构建体产生的那些，除非邻近插入DNA(“侧翼DNA”)的染色体DNA的序列是已知的。事件特异性PCR测定例如由Tavemiers等(J.Agric.Food Chem.，53：3041-3052，2005)进行了讨论，其中显示了转基因玉米品系Bt11、Bt176和GA21以及油菜(canola)事件GT73的事件特异性跟踪系统。在该研究中，基于每个事件的基因组/转基因接合处的序列设计事件特异性引物和探针。转基因植物事件特异性DNA检测方法也在美国专利号7,632,985；7,566,817；7,368,241；7,306,909；7,718,373；7,189,514、7,807,357和7,820,392中描述。

发明概述