[发明专利]一种玻璃酸酶的提取方法

权利要求书

1.一种提取玻璃酸酶精品的方法，其特征在于，采用酸液提取和硫酸铵盐析得玻璃酸酶粗品，粗品再经透析、热原处理、冻干得玻璃酸酶精品，所述玻璃酸酶精品的效价可以达到340iu/mg。

2.权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(一)提取：

将羊睾丸除内外皮层及付睾丸，绞成糜浆，称取糜浆加酸液，搅拌、浸渍，过滤，滤液调pH；取滤渣再加酸液，搅拌、过滤，滤液调pH；所述酸液为冰醋酸，盐酸和水的混合酸液；

(二)粗制：

合并两次过滤液，在不断搅拌下，加入固体硫酸铵，搅拌溶解，静置12小时，过滤，留固体；量取滤液，在不断搅拌下，加入固体硫酸铵，溶解，静置12小时，过滤，合并两次固体，得粗品；

(三)精制：

(1)透析

粗品溶于少量水中，调pH，以透析袋包扎，在磷酸盐-柠檬酸缓冲液中透析24小时；

(2)热原处理：

将透析液离心，过滤，将滤液放冰浴中冷却，加入滤液0.1体积的15％磷酸三钠(Na₃PO₄·12H₂O)溶液，在不断搅拌下，缓缓加入滤液0.06体积的20％醋酸钙(Ca(CH₃COO)₂·H₂O)溶液，并以NaOH溶液调pH8-9，离心，收集上清液，之后上清液调pH6.5～7.0；

(3)冻干

将滤液冷冻干燥，即得无热原的玻璃酸酶精品。

3.权利要求书2所述的方法，其特征在于，在步骤(一)中，第一次每1kg糜浆加酸液1.0-1.5L，第二次酸液仍根据开始糜浆量加入，每1kg糜浆加酸液0.2-0.3L。

4.权利要求书2所述的方法，其特征在于，在步骤(一)中，酸液提取后调节滤液的pH值均为3.0～4.5。

5.权利要求书2所述的方法，其特征在于，在步骤(二)中，第一次每1L滤液加固体硫酸铵200-230克，第二次每1L滤液加固体硫酸铵270-300克。

6.权利要求书2所述的方法，其特征在于，步骤(三)的(1)中的pH值调为3.5～5.0。

7.权利要求书2所述的方法，其特征在于，步骤(三)的(2)中的透析液在过滤前以及调pH值至8-9后都要进行离心，离心时间：20分钟～60分钟，转速：3000～4000r/min。