[发明专利]靶向小胶质细胞的miR-21复合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种多肽-基因复合物，还涉及该复合物的制备方法和在制药领域中的应用。

背景技术

小胶质细胞作为中枢神经系统免疫防疫的第一道防线，在炎症反应中起重要作用。当有外来病原体入侵或有细胞死亡，小胶质细胞会迅速被激活并将其清除，同时释放炎症因子介导炎症反应。但有研究表明，过度活化的小胶质细胞可能加速某些中枢神经系统疾病的进程，而其释放的细胞毒性因子也会对神经细胞造成进一步的损伤。因此，适当抑制小胶质细胞的活性可能是治疗中枢神经系统疾病的有效途径。

微小RNA（microRNA, miRNA）是一类约21-25个核苷酸的非编码RNA分子，普遍存在于真核生物中，不编码蛋白质或多肽，而是与靶基因的信使RNA（mRNA）3’非翻译区互补结合，导致靶基因mRNA的降解或翻译抑制，从而实现转录后基因调控作用。近年来，miRNA与神经系统疾病的发病关系越来越受重视。miRNA已被证实参与了神经细胞的发育与分化、细胞活化及应答调控等过程，并且与神经系统有关疾病的发生发展密切相关。例如，在缺血缺氧引发的小胶质细胞介导的炎症反应中，小胶质细胞特定miRNA会发生表达改变，调控宿主细胞的基因表达，应对微环境做出相应的反应，从而参与疾病的发生与发展。因此，miRNA在小胶质细胞介导的中枢神经系统疾病的治疗领域可能具有极为广阔的应用前景。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种miR-21复合物，该复合物可以特异靶向小胶质细胞，抑制小胶质细胞的活化，进而抑制由小胶质细胞介导的中枢神经系统疾病的发生或恶化。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1．靶向小胶质细胞的miR-21复合物，由K9肽和S9肽的融合肽与miR-21通过静电作用结合而成，所述K9肽的氨基酸序列为KKKKKKKKK（Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys- Lys），所述S9肽的氨基酸序列为VVMKFLTQQ（Val-Val-Met-Lys-Phe-Leu-Thr-Gln-Gln）。

进一步，所述K9肽和S9肽的融合肽由K9肽的羧基端和S9肽的氨基端直接连接而成。

2．靶向小胶质细胞的miR-21复合物的制备方法，是在涡旋条件下，向含有miR-21和氯化钠的水溶液中滴加K9肽和S9肽的融合肽溶液，滴毕，继续涡旋20~60分钟，再静置20~60分钟，即得靶向小胶质细胞的miR-21复合物。

进一步，所述miR-21与K9肽和S9肽的融合肽的质量比为2.5:1。

进一步，所述靶向小胶质细胞的miR-21复合物的制备方法是在涡旋条件下，向含有浓度为500μg/mL的miR-21和浓度为1mg/mL的氯化钠的水溶液中，滴加等体积浓度为200μg/mL的K9肽和S9肽的融合肽溶液，滴加完毕后，继续涡旋30分钟，再静置30分钟，即得靶向小胶质细胞的miR-21复合物。

3．靶向小胶质细胞的miR-21复合物在制备治疗由小胶质细胞介导的中枢神经系统疾病的药物中的应用。

本发明的有益效果在于：K9肽为带正电荷的短肽，可通过电性中和作用与带负电荷的miRNA聚合形成致密颗粒，提高细胞对miRNA的摄取率，增强转染效率。CX3CR1受体在中枢神经系统中主要在小胶质细胞上表达，来源于US28受体N末端的诱惑配体多肽S9可以阻断人源CX3CR1受体结合生理性趋化因子形成的趋化作用，但其本身不引起趋化运动，不影响胞内信号转导和细胞自然活性。本发明所述miR-21复合物可通过S9肽的导向作用，特异靶向小胶质细胞表面特异性CX3CR1受体，在S9肽与CX3CR1受体作用的同时，miR-21高效转染入小胶质细胞，抑制小胶质细胞的活化，进而抑制由小胶质细胞介导的中枢神经系统疾病的发生或恶化，可用于制备治疗由小胶质细胞介导的中枢神经系统疾病的药物，在神经系统疾病治疗领域有着良好的开发应用前景。

附图说明

图1为透射电镜鉴定miR-21复合物。

图2为miR-21复合物转染的小胶质细胞活化后细胞因子的分泌水平。

图3为miR-21复合物转染的小胶质细胞对少突胶质细胞的杀伤水平。

具体实施方式