[发明专利]3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化方法

权利要求书

1.一种3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化方法，其特征在于，包括以下步骤:

（一）3T3-L1前脂肪细胞株的复苏：从液氮种取出细胞株，立即置于37℃水浴箱中，至细胞液完全溶解时取出，将复苏的细胞加入在室温1000rpm离心5min，弃去上清，再加入培养液，吹打重悬，将重悬的细胞及培养液吸入培养皿中，显微镜下观察细胞形态及数量，将培养皿置于5%CO₂的37℃恒温培养箱中培养；

（二）3T3-L1前脂肪细胞株的培养：显微镜下见细胞贴壁，呈梭行，透亮，细胞每2天更换1次培养液，倾斜培养皿，将培养液用移液管移去，沿壁加入培养液；

（三）3T3-L1前脂肪细胞株的传代：显微镜下见细胞贴壁，呈梭形或多角形，细胞密度约80%，倾斜培养皿，将培养液用移液器移去，沿壁加入温热的PBS溶液6ml，晃动培养皿后，用移液器移去，重复一次，加入Trypsin进行消化，显微镜下见细胞由不规则多角形或梭形收缩成圆形，过程约30秒，加入培养液终止消化，用移液器吹打，使细胞脱离培养皿底，吸入离心管中，1000rpm离心4min，倾去上清，加入培养液，吹打使细胞分散；取含有细胞的培养液加入孔板，置于5%CO₂的37℃恒温培养箱中培养；

（四）3T3-L1前脂肪细胞株的诱导分化：上述传代细胞培养至完全长满后3天开始诱导分化；加入含有诱导剂（1.0uM地塞米松，1.0mM IBMX，1.7uM胰岛素）和小牛血清（10%）的DMEM培养液，培养2天；显微镜下见少数细胞呈圆形，并有脂滴出现；加入仅有1.7uM胰岛素(1.7uM）、小牛血清（10%）的DMEM培养液继续培养；继续诱导6天后，显微镜下见细胞基本呈圆形，细胞内含有多个较大的脂滴，即分化为成熟的脂肪细胞。