[发明专利]高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种菌株筛选方法。

 

背景技术

蛋白酶是水解蛋白质肽链的总称，包括酸性(pH 2．5～3)、中性(pH 7左右)和碱性(pH 8左右)3种。规模化养殖畜禽水产动物，尤其是养殖幼年动物，因其消化器官分泌的酶系和酶量(内源酶)不足，对饲料蛋白质消化能力较差，极易引起消化不良、腹泻与消瘦等疾病。因此，在饲料中添加酸性和中性蛋白酶，以提高动物对蛋白质的水解效率，促进动物对饲料蛋白质的吸收效率。但目前，国产饲用酸性蛋白酶比较少，主要是由于菌种酶活力低，生产成本高，因而其饲料营养研究有待于进一步深入展开。

地衣芽孢杆菌细胞形态和排列呈杆状、单生，可添加进饲料，适合水产养殖，能有效防止水产动物肠炎，烂腮等疾病，具有较强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性，促进饲料中营养素的降解，使水产动物对饲料的吸收利用更加充分，能分解养殖池中的有害有毒物质，净化水质，还可以刺激水产动物免疫器官的发育，增强机体免疫力。

现有技术筛选蛋白酶地衣芽孢杆菌的方法普遍存在对菌株选择性低，筛选方法不科学，时间周期长，效率低的问题。

 

发明内容

本发明的目的在于，提供一种高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法，选择性强，效率高，所得菌株具备作为工业菌株的能力。

本发明提供的高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法，包括以下步骤：

（1）    菌株的处理与富集，取海水、污水适量接种至富集培养基中，富集培养基于35℃，170r/min振摇24h，制得富集菌液；

（2）    菌株的初步筛选，分别取适量所述富集菌液接种于脱脂奶粉平板培养基上，分别于35℃培养48h后观察；

（3）    菌株的复筛，取初筛后的菌株接种种子培养基，170r/min，35℃振荡培养24h，再将菌种液以体积分数1％接种于发酵培养基，170r/min，35℃振荡培养48h，12000r/min离心20min，收集上清液，采用改良Lowry法检测蛋白酶活力。

所述步骤（1）中的富集培养基由蛋白胨5g/L，酵母膏1g/L，磷酸高铁0.1g/L，琼脂20g/L，及海水配制而成，pH值为7.6；所述步骤（2）中脱脂奶粉平板培养基是在TS（50 mmol/L Tris-HCl、150 mmol/L NaCl，pH8.0）中加入1%琼脂糖和1%脱脂奶粉，0.06 MPa 高压灭菌10min，待温后倾注平板；所述步骤（3）中种子培养基由蛋白胨15g/L，酵母膏5g/L，酪素3g/L，氯化钠5g/L配制而成，pH为7.5；所述步骤（3）中发酵培养基由蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化钠5g/L配制而成，pH为7.5。

本发明提供的高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法，其有益效果在于，对高产蛋白酶菌株选择性强；筛选过程采用混合筛选，效率高；方法科学、时间周期短。

 

具体实施方式

下面结合一个实施例，对本发明提供的高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法进行详细的说明。

 

实施例

本实施例的高产蛋白酶地衣芽孢杆菌的筛选方法，包括以下步骤：

（1）    菌株的处理与富集，取海水、污水适量接种至富集培养基中，富集培养基于35℃，170r/min振摇24h，制得富集菌液；

（2）    菌株的初步筛选，分别取适量所述富集菌液接种于脱脂奶粉平板培养基上，分别于35℃培养48h后观察；

（3）    菌株的复筛，取初筛后的菌株接种种子培养基，170r/min，35℃振荡培养24h，再将菌种液以体积分数1％接种于发酵培养基，170r/min，35℃振荡培养48h，12000r/min离心20min，收集上清液，采用改良Lowry法检测蛋白酶活力。

所述步骤（1）中的富集培养基由蛋白胨5g/L，酵母膏1g/L，磷酸高铁0.1g/L，琼脂20g/L，及海水配制而成，pH值为7.6；所述步骤（2）中脱脂奶粉平板培养基是在TS（50 mmol/L Tris-HCl、150 mmol/L NaCl，pH8.0）中加入1%琼脂糖和1%脱脂奶粉，0.06 MPa 高压灭菌10min，待温后倾注平板；所述步骤（3）中种子培养基由蛋白胨15g/L，酵母膏5g/L，酪素3g/L，氯化钠5g/L配制而成，pH为7.5；所述步骤（3）中发酵培养基由蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化钠5g/L配制而成，pH为7.5。