[发明专利]在田间施用芥子酶制剂提高菜粕抑菌防病药效的方法

权利要求书

1.一种在田间施用芥子酶制剂提高菜粕抑菌防病药效的方法，是通过芥子酶制剂促进菜粕中硫代葡萄糖苷快速降解，释放异硫氰酸酯进而发挥抑菌防病的药效，其特征在于：土壤温度在15℃以上，将田块中前茬作物产生的残体清除干净，土壤施完底肥后旋耕20-25厘米，菜粕均匀洒入田间，菜粕用量为200-400公斤/亩，再将芥子酶制剂均匀洒入田间，芥子酶制剂用量为1-1.5公斤/亩，再将土壤旋耕、浇水,使得土壤水分含量为田间最大持水量的60-70%,并覆盖塑料薄膜,土温高于25℃时，覆膜，时间为15-20天，土温低于25℃时，覆膜时间为20-30天,然后揭膜通气2-3天，即可提高菜粕抑菌防病药效。

2.根据权利要求1所述的在田间施用芥子酶制剂提高菜粕抑菌防病药效的方法，其特征在于：所用菜粕的硫代葡萄糖苷含量至少为40μmol/g，芥子酶制剂中芥子酶活性为100-200U/g。

3.根据权利要求1或2所述的在田间施用芥子酶制剂提高菜粕抑菌防病药效的方法，其特征在于：所述的芥子酶制剂由深绿木霉液体纯培养获得，具体方法为对深绿木霉进行纯培养，获得液体纯培养物，将液体纯培养物过四层纱布，收集纱布上的菌丝，将菌丝经超声波破碎后静置、离心，收集上清液即获得芥子酶液，将芥子酶液用载体吸附后，自然晾干或30℃烘干后即为芥子酶制剂。

4.根据权利要求3所述的在田间施用芥子酶制剂提高菜粕抑菌防病药效的方法，其特征在于：将对深绿木霉进行纯培养，获得液体纯培养物是指：将深绿木霉接种到试管斜面培养基中进行活化培养，再将斜面培养好的菌株接种到对应的容量为250ml且装有80ml液体种子培养基的三角瓶中，将三角瓶置于转速160-180r/min、温度为28±2℃的摇床上培养24-36小时，然后再以体积比5-10%的接种量分别接入到容量为2000ml且装有800ml液体生产培养基的大三角瓶中，将大三角瓶置于转速180r/min、温度为28±2℃的摇床上培养72-96小时，当液体培养物刚开始出现黄颜色时结束培养，获得深绿木霉液体纯培养物；

所述的试管斜面培养基为PDA培养基，配制方法为：马铃薯200克，葡萄糖或蔗糖20克，琼脂15-20克，水1000毫升，pH自然，马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后用2层纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补足水至1000毫升，121℃高压灭菌20min；

所述的液体种子培养基和液体生产培养基为：燕麦20 g , FeSO₄·7H₂O 0.001g, MnCl₂·4H₂O 0.001g,ZnSO₄·7H₂O 0.001g，溶解在1000毫升水中，121℃高压灭菌25min。

5.根据权利要求3所述的在田间施用芥子酶制剂提高菜粕抑菌防病药效的方法，其特征在于：将菌丝经超声波破碎后静置、离心，收集上清液即获得芥子酶液是指：将从纱布上收集的菌丝与PH7.0的磷酸缓冲液以重量比1：5均匀混合，在功率为200W超声波破碎仪中破碎10分钟 ，然后将破碎好的菌丝液置于4℃冰箱中放置1小时，然后在4℃，4000  r/min离心15 min，取离心后的上清液即为芥子酶液；

 PH7.0的磷酸缓冲液是指：氯化钠8g，氯化钾0.2g，磷酸二氢钾0.24g，磷酸氢二钠3.58g溶解在1000毫升水中。

6.根据权利要求3所述的在田间施用芥子酶制剂提高菜粕抑菌防病药效的方法，其特征在于：将芥子酶液用载体吸附所用的载体为过60目筛的草炭粉，该草炭粉经121℃，灭菌40分钟后使用，芥子酶液与草炭粉的混合比例为体积比1：8-1：10 ，混合后的混合物自然风干或30℃烘干后过40目筛，即获得芥子酶制剂。