[发明专利]用于诊断癌症的生物标志物以及使用该生物标志物分离癌细胞的方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2012年1月10日向韩国知识产权局提交的韩国专利申请No.10-2012-0003081的优先权，在此将其全部公开内容引用作为参考。 

技术领域

本文涉及多种用于检测癌症干细胞或经历了上皮-间充质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的循环癌细胞的生物标志物，用于检测癌症干细胞或经历了上皮-间充质转换的循环癌细胞的试剂盒，所述试剂盒包括生物标志物，用其诊断癌症的方法，以及分离癌症干细胞或经历了上皮-间充质转换的循环癌细胞的方法。 

背景技术

在具有实体癌的患者中出现的肿瘤转移是涉及单个肿瘤细胞的释放和这些细胞经由血管转移至身体其他部位的过程，是癌症引起死亡的主要原因。目前，通常使用活组织检测(在转移的早期阶段将组织的一部分取出并进行分析的方法)来诊断癌症。但是，该方法的缺点是不易确定准确的活检位点。另一方面，目前备受关注的液体活组织检测是仅收集血液样品并检测血液中肿瘤细胞的方法。该方法的优点在于确定癌症进展和治疗，以及在早期阶段检测和诊断癌症。 

随着对能快速确定转移癌病人治疗结果和灵敏反映药效的检测方法的强烈需求，对因肿瘤浸润而出现在癌症患者血流中的循环肿瘤细胞(CTC)、以及患者其它器官中出现了但未被临床发现的播散型肿瘤细胞(disseminatedtumor cell,DTC)的检测越来越受到关注。CTC是出现在血液中、并因此在机体中循环和在肿瘤转移中发挥关键作用的罕见肿瘤细胞。相应地，检测血液中的肿瘤细胞仍是癌症诊断和治疗中重要的课题。 

目前，作为抗癌治疗的方法，在所有未经确认CTC或DTC存在与否的 病例中，都对大多数患者给药抗癌药物。因此，对于根据经检测和分析CTC而确定的CTC的存在与否来选择性给予抗癌药物，或者对于根据CTC的分子性质来进行个性化给药以改进抗癌药物的效力，都有需求。 

已知CTC涉及癌症的转移和复发。尤其是，已有人提出，CTC很可能包含癌症干细胞，后者是近期癌症研究的最重要的主题。因此，人们希望有通过分析CTC来预测现有活检方法无法预测的癌症预后的新可能性，并希望有基于它来开发个性化治疗方案的可能性。 

但是，CTC在血液中的含量非常少且不稳定，故很难检测CTC和对其进行计数。因此，仍需要开发能检测患者机体中CTC、癌细胞或癌症干细胞的高度敏感的诊断方法，以及有效分离生物样品中所含CTC的方法，以及有关的设备。 

发明概述

本发明提供了用于检测癌症干细胞或经历了上皮-间充质转换的循环癌细胞的生物标志物，该生物标志物包括窖蛋白(Caveolin)-1。 

本发明提供了用于检测癌症干细胞或经历了上皮-间充质转换的循环癌细胞的试剂盒，该试剂盒包括特异性结合窖蛋白-1的抗体，或其片段或其抗原结合片段。 

本发明提供了用于从生物样品中检测窖蛋白-1以提供癌症诊断所需的信息的方法。 

本发明提供了用窖蛋白-1作为生物标志物来分离癌症干细胞或经历了上皮-间充质转换的循环癌细胞的方法。 

附图说明

通过后文对实施方案的描述，并结合附图，本发明的这些和/或其他方面将更为明显和更容易理解： 

图1示出了根据本发明一实施方式的western印迹结果，其显示九种癌细胞系中窖蛋白-1的表达水平； 

图2A~2C的图是显示根据本发明多个实施方式的免疫细胞化学和western印迹结果，它们表明，在MCF7细胞系中诱导了上皮-间充质转换，其中，球形表示上皮-间充质转换-诱导的细胞； 

图3的图显示根据本发明一实施方式的比较结果：其比较了具有窖蛋白-1抗体的珠与经历了上皮细胞-间充质转化的MCF-7细胞结合的结合亲和力、和这些珠与正常癌细胞结合的结合亲和力；以及 

图4的图显示根据本发明实施方式的western印迹结果，确认窖蛋白-1、蜗牛蛋白(Snail)、ALDH1、CD133和CD44在上皮-间充质转换-诱导的MCF7细胞中的表达水平。 

发明详述