[发明专利]一种提高抗肝片吸虫病DNA疫苗免疫保护率的疫苗组合及制备方法

权利要求书

1.一种提高编码肝片吸虫Cat L1（FhCat L1）DNA疫苗保护率的疫苗组合，所述疫苗组合为pVAX1-Cat L1+pIL4+pFlt3L，其是采用能诱导树突状细胞（DC）成熟、增加DC数量和频率的Flt3L及能诱导宿主免疫反应趋向Th2的细胞因子IL4作为Cat L1（FhCat L1）DNA疫苗的分子佐剂，提高抗肝片吸虫病DNA疫苗的保护率。

2.一种制备提高编码肝片吸虫Cat L1（FhCat L1）DNA疫苗保护率的疫苗组合的方法，其特征在于所述包括以下步骤：

1）编码IL4、Flt3L的真核质粒的构建：小鼠IL4序列采用特异性克隆引物(P3，P4), P3-5' CACCATG GGT CTC AAC CCC CA 3'，P4- 5' CTA CGA GTA ATC CAT TTG CA 3'; 小鼠Flt3L序列采用特异性克隆引物(P5，P6), P5-5' CACCATG ACA GTG CTG GCG CCA GC 3'，P6-5' CTA GGG ATG GGA GGG GAG GG 3'；在克隆引物P3，P5分别引入接头序列pcDNA3.1的CACC；获得的小鼠IL4/Flt3L基因回收后连接入pVAX1质粒，构建得到pVAX1-IL4和pVAX1-Flt3L；

2）编码候选基因Cat L1的真核质粒的构建：其中，特异性克隆引物(P1，P2)，P1- 5' CACCGGATCCGTA CTG ACT ATT GGA TTG TG 3', P2-5' CC GAATTCTCA CGG AAA TCG TGC CAC CA 3', 在克隆引物P1，P2的上下游分别引入BamH I和EcoR I酶切位点；扩增得到的Cat L1基因回收后连接入pMD18-T载体，得到pMD-Cat L1，再将Cat L1基因从pMD-Cat L1亚克隆入pVAX1质粒获取pVAX1-Cat L1质粒；

3) 利用大肠杆菌工程菌（Escherichia coli）和真核细胞Cos7表达Cat L1蛋白；

4)Cat L1多克隆抗体的制备；

5)纯化和鉴定Cat L1蛋白；

6)获得疫苗组合pVAX1-Cat L1+pIL4+pFlt3L。