[发明专利]一种黄曲霉毒素B1液相色谱检测用富集方法

权利要求书

1.一种黄曲霉毒素B₁液相色谱检测用富集方法，其特征在于：它包括以下步骤：

（1）黄曲霉毒素B₁富集材料的制备：  

在鳞片石墨中加入硫酸和磷酸组成的混酸及高锰酸钾，进行初步氧化反应，然后通过水解反应形成膨胀的氧化石墨，后用双氧水、盐酸和去离子水依次多次洗涤纯化得到氧化石墨，然后将纯化后的氧化石墨通过高强度的超声解离成单层氧化石墨烯，再经离心选取2000rpm离心30分钟不沉降且在5000rpm离心30min沉降而得到的；

（2）将上述制备的黄曲霉毒素B₁富集材料加入待测样品的甲醇水溶液中，所述体系中甲醇的含量按体积百分数计最高不超出体系总体积的12.5%，所述黄曲霉毒素B₁富集材料的质量与体系总体积比至少要达到0.625g/mL，室温混合，震荡10-30min以进行黄曲霉毒素B₁的富集，离心，去掉上清液，然后用甲醇进行洗脱，以将黄曲霉毒素B₁富集材料中富集的黄曲霉毒素B₁洗脱至甲醇中，得到含黄曲霉毒素B₁的甲醇洗脱液，液相色谱检测备用。

2.根据权利要求1的黄曲霉毒素B₁液相色谱检测用富集方法，其特征在于：所述步骤（2）的体系在需要时加水进行稀释，以使体系中甲醇含量按体积百分数计最高不超出体系总体积的12.5%；所述待测样品的甲醇水溶液用量为4-8mL。

3.根据权利要求1的黄曲霉毒素B₁液相色谱检测用富集方法，其特征在于：所述步骤（2）中黄曲霉毒素B₁富集材料的质量与体系总体积比为0.625-0.75g/mL。

4.根据权利要求1的黄曲霉毒素B₁液相色谱检测用富集方法，其特征在于：所述步骤（2）体系中黄曲霉毒素B₁的含量应在0.8-100ng/mL范围内，如超出，可对待测样品的甲醇水溶液进行相应浓缩或稀释处理后再进行富集。

5.根据权利要求1的黄曲霉毒素B₁液相色谱检测用富集方法，其特征在于：所述步骤（2）中甲醇洗脱步骤为：将甲醇加入到富集了黄曲霉毒素B₁的黄曲霉毒素B₁富集材料中，混匀，离心，收集上清液，即为含黄曲霉毒素B₁的甲醇洗脱液。

6.根据权利要求1的黄曲霉毒素B₁液相色谱检测用富集方法，其特征在于：所述步骤（2）中甲醇洗脱步骤还包括重复洗脱步骤，即在前述离心得到的沉淀中加入甲醇，混匀，离心，将得到的上清液和前述上清液合并，得到含黄曲霉毒素B₁的甲醇洗脱液。

7.根据权利要求1的黄曲霉毒素B₁液相色谱检测用富集方法，其特征在于：所述步骤（2）还包括将甲醇洗脱液中的甲醇吹至近干后，加入三氟乙酸和正己烷衍生，然后加流动相进行定容，备用。

8.根据权利要求1的黄曲霉毒素B₁液相色谱检测用富集方法，其特征在于：所述黄曲霉毒素B₁富集材料的制备中高锰酸钾与鳞片石墨的质量比为6:1；硫酸和磷酸的体积比为9:1；所述的石墨在初步氧化过程中的质量分数为0.70%~0.75%，在水解后的最终反应体系中的质量分数为0.3%~0.375%；所述的初步氧化反应条件为50℃搅拌反应12-48小时。

9.根据权利要求1的黄曲霉毒素B₁液相色谱检测用富集方法，其特征在于：所述步骤（1）中超声功率为800W或以上，超声时间为1h或以上。