[发明专利]一种制备高纯度阿霉素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗肿瘤抗生素的制备方法，具体而言，本发明涉及一种制备高纯度阿霉素的方法。

背景技术

阿霉素是蒽环类抗生素（如阿霉素、柔红霉素、表阿霉素）的一种，是最广泛应用的抗肿瘤药物之一。它能使DNA的双螺旋链解开，改变DNA的模板性质，阻止和干扰DNA聚合酶，抑制DNA的合成和RNA的合成，从而阻止细胞分裂（抑制核酸合成）。阿霉素主要用于治疗急慢性白血病、恶性淋巴瘤、胃癌、肺癌、膀胱癌、软组织肉瘤、乳腺癌、网状细胞肉瘤、恶性畸胎瘤等恶性肿瘤疾病。其结构如式Ⅰ所示。

式Ⅰ

1974年，美国专利US 3,803,124公开了阿霉素可由发酵产物柔红霉素通过化学半合成而制得。意大利的法玛西雅厄普约翰公司在中国专利CN1147835A中公开了一种由柔红霉素通过酶法转化制备阿霉素的方法。目前，以柔红霉素为中间体半合成是工业化生产阿霉素的方法。但是，化学合成方法存在产品质量不稳定、环境污染大、生产成本高、不符合EHS要求等问题。专利CN 102363755A公开了一种能够通过一步发酵法生产阿霉素的链霉菌（Streptomyces sp.H323，保藏编号为CGMCC NO.4827），其阿霉素发酵单位达到工业化生产要求。

目前，以柔红霉素为前体通过半合成或生物转化得到的阿霉素作为起始原料，进行分离纯化制备阿霉素的研究比较多。美国专利US4,861,870将半合成或生物转化得到的阿霉素作为起始原料，起始阿霉素色谱含量为70～80%，通过离子交换树脂吸附，用有机溶剂的酸水溶液洗脱，再通过大孔吸附树脂层析，然后用有机溶剂的微酸水溶液洗脱，最后通过结晶方式得到阿霉素成品。该方法制备的阿霉素成品，色谱含量仅为98%，单个杂质含量高达1.5%，远远达不到EP、USP标准（色谱含量要求99%以上，单个杂质含量低于0.10%），且该工艺中的阿霉素原料来源要先通半合成或生物转化，工艺繁锁，成本高、周期长、收率低、不适宜产业化。所以，寻找一种简单而且能够制备高纯度阿霉素的纯化方法显得十分重要。

随着制药、生物化工等行业的迅速发展，制备型液相色谱分离技术得到越来越广泛的开发和应用，已成为分离和纯化复杂混合物的重要方法，尤其适用于制备组分复杂、副产物多、单个杂质难分离的生物发酵、生物转化产品。动态轴向压缩（DAC）制备技术具有多方面的优越性，因而得到了更为深入的研究和发展。DAC的核心技术是通过活塞的上下运动来装柱、维持柱压和卸柱，活塞周边配备了特殊设计的密封圈能容许活塞上下自由滑动，同进又能保持高的密封压。活塞运动和压力维持靠的是液压，液压动力比轴向压缩柱的弹簧动力更稳定，更均匀。这些技术使得它具有成本低、寿命长、柱效高、对称性和重复性好的特点，可以装填直径范围大（50mm～1000mm），且保持与分析柱相当的分离效果。但目前为止，尚未发现有任何文献报道采用制备色谱分离技术，特别是DAC制备技术分离纯化阿霉素产品。本发明在吸附色谱分离的基础上，进一步采用制备色谱技术，得到的阿霉素产品纯度高，符合EP和USP的标准，而且本发明工艺操作简单，生产成本低，收率高，完全适合工业化生产。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备高纯度阿霉素的方法，该方法包括如下步骤：

（1）将预提纯的阿霉素溶液经大孔吸附树脂层析分离，所述大孔吸附树脂层析先采用酸性的低浓度的有机溶剂水溶液作为预洗液，预洗，再用酸性的高浓度的有机溶剂水溶液作为洗脱液，洗脱，收集阿霉素组分；

（2）将步骤（1）中得到的阿霉素组分用常规方法除去有机溶剂，再经过制备柱层析分离，所述制备柱层析采用酸性的有机溶剂的水溶液作为流动相，洗脱样品，分段收集含阿霉素的组分，即可得高纯度的阿霉素溶液；

（3）如有必要，将步骤（2）中得到的高纯度阿霉素溶液进行浓缩和析晶制得阿霉素晶体。

其中，步骤（1）所述预提纯的阿霉素溶液是通过以下方法制备得到的：

a).将阿霉素发酵液，用酸调pH值为酸性，过滤，得到预提纯的阿霉素溶液；该阿霉素发酵液可采用专利CN102363755A公开的方法，利用链霉菌（Streptomycessp.H323，保藏编号为CGMCC NO.4827）发酵制备得到；其中，阿霉素发酵液采用盐酸、硫酸或草酸调pH值为酸性，所述的pH值优选为0.5～3.0，更优选1.0～2.5；

或