[发明专利]双峰驼α-乳白蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，是一种双峰驼α-乳白蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法。

背景技术

α-乳白蛋白（alpha-lactalbumin）是主要的乳清蛋白成分之一，具有调节产乳的功能，还有细胞溶解活性，诱导细胞生长抑制和细胞凋亡等多种功能。最近的研究发现，它可能具有抗癌功能，此外，乳白蛋白在氨基酸比例结构方面，以及在功能特性上与人乳都非常相似的。临床研究显示，富含α-乳白蛋白的婴儿配方奶粉是安全的。α-乳白蛋白含有丰富的色氨酸，色氨酸有助于促进宝宝的神经发育，是调节睡眠、食欲情绪的重要因子。而且，α-乳白蛋白是必需氨基酸和支链氨基酸的极好来源，也是唯一能与金属元素和钙元素结合的乳清蛋白成分。

α-乳白蛋白在牛乳中研究的较多，α-乳白蛋白(α-lactalbumin)是牛乳的特异蛋白之一，也是乳清蛋白主要成分之一，占总乳清蛋白10%，牛乳中含量为 0.5 mg/mL至2 mg/mL，分子量为14175u，由 123个氨基酸组成。α-乳白蛋白是必需氨基酸和支链氨基酸的极好来源，是惟一能结合钙的乳清蛋白，它所特有的4个天冬氨酸残基的肽循环位置均能结合钙离子。α-乳白蛋白所含的2个脯氨酸可以中断其一级结构，导致易受蛋白酶水解。

Merin等 (2001)对内蒙古阿拉善双峰驼分娩后第1次所挤的初乳成分进行了研究，结果表明，乳清蛋白氮主要由血清白蛋白和免疫球蛋白组成。随泌乳时间的延长，阿拉善双峰驼驼乳氮分布中酪蛋白比例逐渐升高，乳清蛋白氮比例逐渐降低。24小时后到90天泌乳期内，非蛋白氮占总氮比例变化不大，为5.26％至7.89％。尽管总氮含量随泌乳进行逐渐下降，但在7天至90天泌乳期内，酪蛋白氮及乳清蛋白氮占总氮百分比较为恒定，分别在77.59％至80.36％和12.50％至15.52％，乳清蛋白氮：酪蛋白氮比例在15：85左右。

在食品蛋白中，α-乳白蛋白所含有的色氨酸的比例最高。大量实验表明：食用较高色氨酸含量的蛋白，有助于提高血液中复合胺的释放，在动物实验中发现其有抗焦虑的作用，因此牛奶中的α-乳白蛋白日益引起人们的关注。因此婴幼儿配方乳制品中α-乳白蛋白的含量是衡量其营养成分和品质的标准之一。α-乳白蛋白在蛋白结构、 氨基酸序列及DNA 序列上与溶菌酶有极大的相似性，在氨基酸水平上牛乳中α-乳白蛋白与牛溶菌酶有62. 6%的相似性及35.8%的一致性。

内蒙、新疆地区是双峰驼的主要产地，骆驼资源丰富，是当地重要的经济动物。驼乳在成分、含量等方面与牛乳有一定的区别，因此，研究驼乳中的α-乳白蛋白就显得尤为重要。我们参考了其他九种动物的α-乳白蛋白基因序列，克隆并测序得到了双峰驼驼乳中α-乳白蛋白基因的cDNA序列，并对十种物种基因的CDS序列进行同源性比较并作进化树，为今后研究双峰驼驼乳中α-乳白蛋白提供基础资料。目前，国内外对酪蛋白、α-乳球蛋白等的研究较多，但是国内几乎没有对双峰驼α-乳白蛋白基因方面的研究的相关研究。

发明内容

本发明提供了一种双峰驼α-乳白蛋白基因，该基因是一种乳品中除具有易消化吸收的特点外、还具有杀菌和诱导肿瘤细胞凋亡的功能密切相关的基因，其氨基酸序列与人、鼠、牛等物种α-乳白蛋白氨基酸序列具有很高的相似性。

本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种双峰驼α-乳白蛋白基因、该基因是一种乳品中除具有易消化吸收的特点外、还具有杀菌和诱导肿瘤细胞凋亡的功能密切相关的基因，具有SEQ ID NO.1中从核苷酸第4-432位的核苷酸序列。

本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种双峰驼α-乳白蛋白基因的重组蛋白。

下面是对上述发明技术方案之二的进一步优化或/和改进：

上述重组蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。 

上述重组蛋白为SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

上述重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

上述重组蛋白通过设计一对引物从双峰驼α-乳白蛋白中得到双峰驼α-乳白蛋白基因，该引物对的核苷酸序列正向引物为SEQ ID NO.3和反向引物为SEQ ID NO.4，其序列信息如下：

SEQ ID NO.3：5’- ATGAAGCTCTTCTTCCCCGCC -3’，

SEQ ID NO.4：5’- TATTCTGTGCTGTCATTGTTTTG -3’。