[发明专利]一种用于棉花采摘前促脱叶的生物菌剂的制备方法

权利要求书

1.一种用于棉花采摘前促脱叶的生物菌剂，所述生物菌剂是采用如下方法制得的：

步骤一、制备发酵液

(1)制备菌株ACCC30387的发酵液：液体发酵培养基配方：20％马铃薯汁-1000ml，葡萄糖-20g，KH₂PO₄-3g，MgSO₁·7H₂O-1.5g，硫胺素-0.05g，羟烯腺嘌呤-0.3g，烯酰腺嘌呤-0.3g，黄原胶-3g，琼脂-5g，pH值调至6.0；按上述比例配置好所需发酵培养基的量，然后将菌株于无菌条件下接入液体发酵培养基中，在28℃条件下于摇床上振荡培养72小时后，至有效活菌数均达到2.0×10⁹个/ml制得一级种子；然后将培养好的一级种子按3％的比例，接入装有按上述比例配好的已经灭菌并冷却后的发酵罐中进行发酵生产，发酵培养温度28℃，通气量开始在1∶1.2(v.v.m)，培养24小时后增至1∶1.5(v.v.m)，48小时后降至1∶1(v.v.m)，发酵至72小时发酵完毕，经过镜检发酵液中ACCC30387：灰葡萄孢的菌量达到20-30亿个/ml时为合格菌液；

(2)制备菌株ACCC30384的发酵液：液体发酵培养基配方：蔗糖-30g，MgSO₄·7H₂O-0.5g，FeSO₄·4H₂O-0.01g，NaNO₃-3g，KCl-0.5g，K₂HPO₄-1g，黄原胶-3g，琼脂-5g，清水补齐至1000g；按上述比例配置好所需发酵培养基的量，然后将菌株于无菌条件下接入液体发酵培养基中，在28℃条件下于摇床上振荡培养72小时后，至有效活菌数均达到2.0×10⁹个/ml制得一级种子；然后将培养好的一级种子按3％的比例，接入装有按上述比例配好的已经灭菌并冷却后的发酵罐中进行发酵生产，发酵培养温度28℃，通气量开始在1∶1(v.v.m)，培养24小时后增至1∶1.2(v.v.m)，48小时后继续增至1∶1.5(v.v.m)。发酵至72小时发酵完毕，经过镜检发酵液中ACCC30384：葡萄孢的菌量达到20-30亿个/ml时为合格菌液。

(3)制备菌株ACCC31183：的发酵液：液体发酵培养基配方：20％马铃薯汁-1000ml，葡萄糖-20g，KH₂PO₄-3g，MgSO₄·7H₂O-1.5g，硫胺素-0.05g，羟烯腺嘌呤-0.3g，烯酰腺嘌呤-0.3g，黄原胶-3g，琼脂-5g，pH值调至6.0；按上述比例配置好所需发酵培养基的量，然后将菌株于无菌条件下接入液体发酵培养基中，在25℃条件下于摇床上振荡培养72小时后，至有效活菌数均达到2.0×10⁹个/ml制得一级种子；然后将培养好的一级种子按3％的比例，接入装有按上述比例配好的已经灭菌并冷却后的发酵罐中进行发酵生产，发酵培养温度25℃，通气量开始在1∶1(v.v.m)，培养24小时后增至1∶1.2(v.v.m)，48小时后继续增至1∶1.5(v.v.m)。发酵至72小时发酵完毕，经过镜检发酵液中ACCC31183：禾谷丝核菌的菌量达到20-30亿个/ml时为合格菌液；

步骤二：生物菌剂的制备

将按重量计的菌株ACCC30387的发酵液20％，菌株ACCC30384的发酵液20％，菌株ACCC31183的发酵液20％，腐植酸钾10％，海藻酸钾10％，用少量柠檬酸或碳酸氢钠将pH值调节至6.0，余量用清水补齐后混合搅拌溶解均匀，制得本发明所述生物菌剂，所述％均为重量百分比。

2.权利要求1的生物菌剂用于棉花采摘前促脱叶的用途。