[发明专利]一种检测铬生物可利用度的微生物细胞传感器

权利要求书

1.一种微生物细胞传感器，由细菌作基本材料，通过基因工程手段构建，用来检测水体和土壤中铬的生物可利用度。

2.根据权利要求1所述的微生物细胞传感器，其特征在于：大肠杆菌为宿主细胞。

3.根据权利要求1所述的微生物细胞传感器，其特征在于：高灵敏度的萤火虫荧光素酶luc为报告基因。

4.根据权利要求1所述的微生物细胞传感器，其使用方法：

第一步：接种传感器细胞单菌落于50mL三角瓶中，添加氨苄青霉素到终浓度为100μg/mL，37℃，200r·min^-1过夜培养；

第二步：取0.5mL的上述菌液到14.5mL的新鲜LB培养基中，37℃，200r·min^-1培养至OD₆₀₀＝1.2；

第三步：将菌液用新鲜LB培养基稀释至OD₆₀₀＝0.4；

第四步：取50μL稀释后的菌液分别与铬标准溶液、待测样品等体积混合，30℃静置诱导；

第五步：将40μL空载体细胞与50μL诱导培养液混合，加入10μL1M K₂HPO₄(pH7.8)和20mM EDTA的裂解缓冲液，-70℃条件下快速冷冻混合物10min，然后23℃水浴细胞3min，最后加入300μL新鲜配制的裂解混合物(见附录)，混匀后室温孵育10min；

第六步：每个96孔板中加入20μL的裂解液，再加入100μL荧光素酶检测液后，用荧光检测仪立刻检测；

第七步：根据标准样品诱导下传感器细胞的荧光值，制作荧光强度随诱导物铬浓度变化的标准曲线，利用标准曲线计算待测样品的中铬的相对浓度。

5.根据权利要求4所述的微生物细胞传感器的使用方法，其特征在于：微生物细胞传感器的培养温度为37℃，微生物细胞传感器的诱导温度为30℃，荧光强度值运用荧光检测仪进行采集和检测。