[发明专利]分泌牛γ干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株、其单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分泌牛γ干扰素单抗的杂交瘤细胞株、其分泌的单克隆抗体及其在免疫检测及诊断领域的应用。

背景技术

γ干扰素（IFN-γ）主要是由被有丝分裂原或特异性抗原刺激而活化的CD4⁺Th1细胞、CD8⁺T细胞及NK细胞等产生的细胞因子，具有广泛抗病毒、抗肿瘤活性以及免疫调节功能，是机体防御系统的重要组成部分。研究表明内源性IFN-γ水平的高低在很大程度上可以反映机体的细胞免疫状态，而抗原特异性的IFN-γ反应则可以作为机体针对某种特定外来抗原的细胞免疫状态的指标。

IFN-γ及其单克隆抗体（McAb）在畜牧兽医领域有着广泛的应用，将基因重组牛IFN-γ（rBoIFN-γ）及其McAb用于牛病的研究，抗原特异性的BoIFN-γ试验已在很多发达国家被用于多种牛疫病的检测，尤以在牛结核病诊断中的应用最为广泛，相关的研究也最为深入。

IFN-γ的免疫学检测是在特异性抗IFN-γMcAb的基础上建立的用于对样本中的IFN-γ进行定性定量分析的实验方法。应用不同的单抗标记物和检测技术，已经开发出多种方法，如反向被动血凝试验（RPH），酶免疫分析法（EIA），酶联免疫吸附法（ELISA），酶联免疫斑点法（ELISPOT），流式细胞术（FCM）分析法等。

1983年建立的酶联免疫斑点实验（Enzyme-linked Immunospot，简称ELISPOT）技术具有高度的敏感性和应用广泛性，已成为近年来最吸引人的免疫检测方法之一，在疫苗的研发、临床诊断以及基础研究等方面得到广泛应用。与传统的用于IFN-γ检测的抗病毒活性分析方法（AVA）相比，建立在免疫反应基础上的IFN-γ检测方法的灵敏度和特异性更高，作为细胞免疫状态的重要指标，IFN-γ的ELISPOT检测方法目前已被广泛地用于研究基础和临床免疫学、疫苗免疫效果评估、器官移植、过敏反应以及多种胞内病原感染的诊断等。

发明内容

本发明的目的是提供一种分泌牛γ干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体，以及该杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体在免疫检测及诊断领域的应用。

本发明一方面提供了一种分泌牛γ干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株的保藏号为CCTCC NO：C2012107。

该菌株已于2012年9月4日在中国典型培养物保藏中心（地址：武汉市武汉大学）注册保藏，保藏号为CCTCC NO：C2012107，分类命名为：杂交瘤细胞系2G5。

本发明第二方面提供了一种牛γ干扰素单克隆抗体，由保藏号为CCTCC NO：C2012107的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。

本发明第三方面提供了前述分泌牛γ干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及前述牛γ干扰素单克隆抗体在制备牛疫病的检测试剂或诊断试剂中的应用。

本发明第四方面提供了一种牛γ干扰素的ELISPOT检测试剂盒，所述试剂盒包括：

1.选自以下任一：

1）微孔滤膜板和捕获抗体；

2）包被有捕获抗体的微孔滤膜板；

所述捕获抗体为前述牛γ干扰素单克隆抗体；

2.生物素标记牛γ干扰素单克隆抗体；

所述试剂盒中，微孔滤膜板可以事先包被有捕获抗体，也可以只提供空白微孔滤膜板与捕获抗体，在检测前由操作者自行采用常规方法在微孔滤膜板上包被捕获抗体。

所述微孔滤膜板可为各种常见规格的微孔滤膜板，如96孔滤膜板。

所述生物素标记牛γ干扰素单克隆抗体中的牛γ干扰素单克隆抗体不同于前述捕获抗体。生物素标记牛γ干扰素单克隆抗体的方法采用常规。

进一步优选的，所述生物素标记牛γ干扰素单克隆抗体中的牛γ干扰素单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO：C2012108的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。

保藏号为CCTCC NO：C2012108的杂交瘤细胞株已于2012年9月4日在中国典型培养物保藏中心（地址：武汉市武汉大学）注册保藏，分类命名为：杂交瘤细胞系5E11。

进一步的，所述试剂盒中还包括下列试剂中的一种或多种：

1）亲和素-碱性磷酸酶结合物；

2）底物液；

3）洗涤液。

上述试剂均为ELISOPT检测中的通用试剂，不受具体检测项目的限制，因此即可根据需要有选择地加入试剂盒，也可由操作者自行配置或者单独购买。为方便操作者，最优的选择是试剂盒中同时包括亲和素-碱性磷酸酶结合物、底物液和洗涤液。