[发明专利]利用硅胶色谱柱测定棉籽糖含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定食品、饮料中棉籽糖含量的方法，尤其是一种利用硅胶色谱柱测定棉籽糖含量的方法。

背景技术

棉籽糖是一种由三个单糖（果糖、葡萄糖、半乳糖）组成的新型功能性低聚糖。是除蔗糖以外，在自然界分布最广的一种低聚糖。棉籽糖也被称为蜜三糖、棉实糖、桉糖，是一种微生物和酶不能合成的功能性低聚糖，目前主要从棉籽粕和甜菜糖蜜中提取。

由于棉籽糖能够顺利的通过胃肠道而不被吸收，是人体肠道中双歧杆菌等益生菌的增殖因子，可以促进钙原子的吸收，从而增强了人体免疫力，而且其还能够抑制肠内腐败产物、改善排便功能、防止便秘及增强机体免疫力、抵抗肿瘤等，因此其越来越受到人们的重视。目前对于棉籽糖的检测方法有比色法、薄层色谱法和高效液相色谱法等。但是由于比色法和薄层色谱法检测定性能力差，易受杂质成分的干扰而导致检测不准，通用的高效液相色谱法多使用寿命较短的氨基柱或者是昂贵的多糖分析柱，使用成本高，不利于广大食品企业的推广。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种定性效果强、定量准确的测定棉籽糖含量的方法。

为解决上述技术问题，本发明的测定步骤为：

（1）用有机胺类物质作为硅胶表面氨基的改善剂，将其加入到流动相中，活化处理硅胶色谱柱；

（2）用活化好的硅胶色谱柱对检测样品的提取液进行色谱分离，色谱分离时的流动相中添加有有机胺类物质；

（3）经色谱柱分离的各组分进入蒸发光散射检测器中进行检测，即可得到检测样品中的棉籽糖含量。

本发明所述步骤（1）和（2）中的有机胺类物质均为乙二胺；所述步骤（1）和（2）中的流动相均为乙腈水。所述乙腈水的体积比均为乙腈:水＝2.6:1。所述步骤（1）中乙二胺在流动相中的体积分数为0.3%；所述步骤（2）中乙二胺在流动相中的体积分数为0.03%。

本发明所述步骤（1）中活化时流动相的冲洗体积为100个柱体积。所述步骤（2）中流动相的流速为1.0mL/min。

本发明所述步骤（3）中蒸发光散射检测器的参数为漂移管温度为85℃，气体流速为2.2L/min，模式为不分流模式。所述步骤（3）检测时采用外标法定量。

本发明所述硅胶色谱柱的规格为                                                ，粒径5。

本发明所述步骤（2）中提取液是将检测样品用水超声提取，然后过滤而得。所述提取时检测样品与水的质量体积比为1:25，超声时间为15～25min，采用0.45滤膜过滤。

采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本发明采用动态氨基修饰法对硅胶柱进行氨基修饰，然后利用高效液相色谱配合蒸发光散射检测器进行棉籽糖的检测，充分利用了硅胶色谱柱，不必购买昂贵的糖分析柱，而且检测结果准确，检出限低，具有分离度和灵敏度高，适应性强，而且成本低廉的特点。

本发明定性效果强，定量准确，检出限可低至10mg/L，可准确地测定食品、饮料等中的棉籽糖含量；本发明检测效果好，可有效避免峰拖尾现象，分析方法准确快速，干扰小。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

图1是本发明棉籽糖标准品的液相色谱图；

图2是本发明检测样品的液相色谱谱图。

具体实施方式

实施例：本利用硅胶色谱柱测定棉籽糖含量的方法采用下述测定步骤。

试验条件：高效液相色谱仪，配备蒸发光散射检测器；所用试剂均为色谱纯，色谱柱选择规格为、粒径5的硅胶柱；流动相为乙腈水，流动相体积比乙腈:水＝2.6:1；蒸发光散射检测器的漂移管温度85℃，气体流速2.2L/min，不分流模式；进样量为20μL；系统记录色谱，以保留时间定性，以峰面积作为信号响应值，对棉籽糖进行定量分析。

（1）配制含体积分数0.3%乙二胺的乙腈/水(体积比2.6:1)溶液300mL，超声脱气、冲洗活化色谱柱，流速从0.3mL/min逐渐增大至1mL/min，总共冲洗100个柱体积，再以含体积分数0.03%乙二胺的乙腈/水(体积比2.6:1)作为流动相平衡色谱柱，流速1.0mL/min。