[发明专利]一种促神经修复材料及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种促神经修复的材料，属于生物材料领域。

背景技术

目前，理想的组织/器官修复是：形成构造的完整性，即外型的修复，并且能够修复组织/器官的功能，形成功能上的整合修复，包括血管重建，神经重建等。

小肠黏膜下层（small intestinal submucosa，SIS）是一种天然的细胞外基质类生物材料，通常由猪小肠制备。SIS主要含有胶原、氨基多糖、糖蛋白等成分，并且含有多种生长因子，对组织的修复重建及细胞的生长有重要作用，如成纤维细胞生长因子、转化生长因子和血管内皮生长因子等，可通过与细胞表面的多种受体作用后介导细胞信号转导，从而对上皮细胞、血管内皮细胞、软骨细胞、骨细胞等多种细胞具有促进生长、分化的作用。研究表明，SIS中的生长因子虽经消毒、冻干等处理，仍具有生物活性。同时，由于SIS具有无免疫原性、抗微生物活性，能促进组织再生等特性，已作为组织工程的支架材料广泛应用于尿道、膀胱、血管、肌腱、神经、骨等多种组织缺损修复。

神经生长因子（nerve growth factor，NGF）是一种小分子蛋白，是神经营养因子中最早被发现，目前研究最为透彻的，具有神经元营养和促突起生长双重生物学功能的一种神经细胞生长调节因子，NGF包含α、β、γ三个亚单位，活性区是β亚单位。它对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。NGF在组织/器官修复中，特别是神经重建中发挥重要作用，是不可或缺的重要调控因子。研究发现，SIS中NGF含量仅为4.92±2.06pg/cm²。

目前在材料中添加的生长因子的方法主要是直接添加，或通过缓释给药技术来完成。直接添加生长因子的方式因生长因子会在短时间内释放，释放速度和活性均难以控制，有效性差，存在安全隐患。缓释给药技术可以控制生长因子在体内的释放速度，但现有的缓释材料大多为高分子合成材料，价格昂贵，药物释放的稳定性也不尽如人意，还可能因代谢问题给机体带来副作用。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种新的促进神经修复的材料。

本发明促神经修复材料，它包括小肠黏膜下层和神经生长因子，所述神经生长因子的含量为1~500pg/cm²。

所述材料是由如下方法制备：

（1）取小肠黏膜下层和雪旺细胞，将雪旺细胞接种于小肠黏膜下层上，共培养，得复合了雪旺细胞的小肠黏膜下层；

（2）将复合了雪旺细胞的小肠黏膜下层反复冻融，冻干，即得所述的材料。

其中，所述步骤（1）中雪旺细胞的接种密度5×10³个/cm²~2.5×10⁵个/cm²。优选地，所述雪旺细胞为采用双酶分步消化法处理大鼠双侧坐骨神经得到的原代细胞或者RSC96大鼠雪旺细胞，接种密度为2.5×10⁵个/cm²或者5×10³个/cm²。双酶分步消化法采用公知方法，如，宁仁德等，“雪旺细胞分步消化培养及其纯化实验研究”，解剖与临床2003年第8卷第4期公开的分步消化培养法。

其中，所述双酶分步消化法使用的酶是胰蛋白酶和II型胶原酶。

其中，所述步骤（1）共培养的时间是3~15天。

其中，所述步骤（2）中反复冻融是将复合了雪旺细胞的小肠黏膜下层置于液氮中10分钟，37℃处理10分钟，重复操作3次。

其中，所述步骤（2）中反复冻融是将复合了雪旺细胞的小肠黏膜下层置于液氮中8~12分钟，室温放置15~25分钟，置于摇床上用0.2~0.5%SDS溶液洗3~7分钟，去离子水漂洗，重复操作3~5次；再用0.2~0.5%SDS溶液置于摇床上振荡洗15~25分钟，去离子水漂洗5~10分钟。

本发明促神经修复的材料的制备方法，包括如下步骤：

（1）取小肠黏膜下层和雪旺细胞，将雪旺细胞接种于小肠黏膜下层上，共培养，得复合了雪旺细胞的小肠黏膜下层；

（2）将复合了雪旺细胞的小肠黏膜下层反复冻融，冻干，即得所述的材料。

其中，所述步骤（1）中雪旺细胞的接种密度5×10³个/cm²~2.5×10⁵个/cm²。