[发明专利]一种利用性控精液进行经产奶牛冷配的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种奶牛冷配的方法，具体地说，涉及一种利用性控精液进行经产奶牛冷配的方法。

背景技术

解决经产奶牛良繁是奶牛行业至关重要环节，是涉及养牛企业成败之关键。经产奶牛良繁的难度之所以比青年牛大，是因为经产奶牛存在诸多影响因素，如产奶量、子宫状况、卵巢状况、母牛体况等。就奶牛冷配研究而言，早在上世纪70年代大量研究主要在输入精子数与受胎率的关系的问题，并且得出，输入精子数在30万-1400万之间，输入精子数与受胎率呈正相关的结论。这些研究的目的主要是为了寻找出致使奶牛最高怀孕率的冷冻精液装管量的下限。自从性控精液问世以来，由于性控精液分选效率的限制，如目前被认为最有效分选性控精液的美国XY公司Moflo细胞流式仪的精子分离效率是3000-6000个/秒，分离精子准确度高于90％。XY公司中国申请号为98813255.9的专利公开了“以少量精细胞对哺乳动物进行有性别选择的授精”，其考虑利用性控精液进行奶牛冷配的经济性，并主要针对青年牛的冷配而设计。就青年牛的冷配结果而言，利用性控精液的情期受胎率通常在40-50％之间，比非性控常规精液冷配结果的情期受胎率(约70％)要低20％左右。而经产奶牛的精子冷配怀孕受控因素多，利用少量精细胞对经产奶牛不仅达不到冷配怀孕的预期效果，而且还严重影响经产奶牛的产能效果。美国XY公司在中国以“以少量精细胞对哺乳动物进行有性别选择的授精”命名申请的专利申请号还有：2008110128055.5、200810166001.8、200810128056.X、200810128058.9、200810128062.5、200810128059.3、200810128060.6。但这些专利与被批准的专利(专利申请号98813255.9)都未解决经产奶牛的冷配问题。

实际上，“以少量精细胞对哺乳动物进行有性别选择的授精”的专利发明的有效性和实用性不能一概而论，特别是当全方位评价经产奶牛的性控冷配效果时其满意度则不容乐观了。为了彻底解决经产奶牛良繁问题，本发明从奶牛精液的性控分选入手，研究性控精液制品的精子密度、解冻活率、呈直线运动精子数、畸形精子率、顶体完整率、能够提高精子活性的解冻液配方、经产奶牛发情与排卵等细致研究，找到影响利用性控精液实施经产奶牛冷配的因素。通过本发明能够真正解决经产奶牛在利用性控精子冷配繁育的难题。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用性控精液进行经产奶牛冷配的方法。

为了实现本发明的目的，本发明的一种利用性控精液进行经产奶牛冷配的方法，其包括下述步骤：

(1)采集牛精液，用精液保护剂处理，使牛精子活力在采精后的16小时内保持65％以上；

(2)分选出X精子使用或低温冷冻保存；

(3)将步骤(2)的精子制备人工授精样品，精子数量为每支0.25毫升含精子为200万-420万；

(4)将人工授精样品注入发情的经产奶牛体内，使经产奶牛体内至少一个卵受精；

(5)繁殖所需性别的子代奶牛。

其中，步骤(1)所述的精液保护剂的配方为：其包括母液1、母液2和蛋黄液，母液1、母液2和蛋黄液的体积比为5∶4∶1；所述母液1和母液2的配方为：

母液1的配方以1L计为：

母液2的配方以1L计为：

上述精液保护剂处理精液的方法为：向牛精液中加入牛精液体积0.25～0.5倍的精液保护剂。

其中，步骤(2)所述分选X精子的方法是用荧光染色剂进行染色，利用细胞分选仪进行奶牛X精子细胞的分选。

所述荧光染色剂优选为Hoechst33342。

本发明方法中，步骤(2)所述分选出的符合要求的X精子，其直线运动精子数应在50％以上；畸形精子率不高于15％；顶体完整率应高于40％以上。

其中，步骤(3)所述精子数量为每0.25毫升精液含精子数380-420万。

优选地，步骤(3)所述精子数量为每0.25毫升精液含精子数400万。其精子数低于进行典型普通精液的人工授精时的用量每支0.25毫升含精子约2000万个。

其中，步骤(4)所述的经产奶牛是29-56月龄，体重550kg以上的经产健康奶牛。