[发明专利]Brevilin A作为JAK-STATs信号靶向抑制剂的应用

说明书

技术领域

本发明属于医药应用领域，涉及一种 Brevilin A 的医药新用途，尤其涉及Brevilin A 作为 JAK-STATs 信号靶向抑制剂的应用。

背景技术

 细胞中JAK-STATs信号对细胞信号的传导及各项生理活动至关重要，该家族信号的异常会导致众多疾病的发生，包括癌症和免疫相关疾病。JAKs（Janus Kinase）家族包括JAK1,JAK2,JAK3和Tyk2四个成员。而JAKs下游的STATs（Signal transducer and activator of transcription）家族包含7个成员（STAT1-STAT6，其中STAT5A 和STAT5B有两个独立的基因编码）。在许多人类实体瘤及血液相关疾病中，通常STATs活性表现为异常，最常见的为STAT3过度活（Bowman et al., 2000; Garcia and Jove, 1998; Yu et al., 2009）。

    在众多STAT3异常活化的肿瘤细胞中，抑制STAT3信号能有效抑制细胞生长、诱导细胞凋亡和减少肿瘤细胞的转移（Iwamaru et al., 2007; Rahaman et al., 2002）。如在神经胶质瘤（Iwamaru et al., 2007; Rahaman et al., 2002）、乳腺癌（Garcia et al., 2001）、结肠癌）、前列腺癌），黑色素瘤（Niu et al., 2002; Niu et al., 1999）等细胞中，通过STAT3抑制蛋白表达、小干扰 RNA或特异性抑制剂来抑制STAT3抑制剂，能显著下调STAT3下游相关基因，如CyclinD1、Bcl-xl、c-Myc、Survivin等，从而调节肿瘤细胞周期减缓细胞增殖，增加凋亡（Weerasinghe et al., 2007; Zhang et al., 2012）。作为 STATs 家族上游最重要的激酶，由于突变或其他原因引起的JAKs活性过高,持续激活下游蛋白（主要如STATs家族），与上述肿瘤疾病相关外，通常会与血液疾病、自身免疫疾病相关（Baxter et al., 2005; James et al., 2005; Kralovics et al., 2005; Levine et al., 2005; Mullighan et al., 2009）。综上所述在这些相关的疾病中，抑制JAK-STATs 信号将有效抑制和缓解该信号异常活化带来的疾病。

Brevilin A是一种天然产物，可从鹅不食草、短叶老鹤草等天然植物中提取，其结构为：

 中国专利申请201110423357.7公开了一种以STAT3为靶点的药物筛选细胞模型及其构建和应用，在筛选相关抑制剂的过程中，发现 Brevilin A 能有效抑制所选用筛药模型中的荧光素酶活性，经过进一步验证发现，Brevilin A 对 JAK-STATs 信号特别是 JAKs 家族激酶活性及下游STAT3有稳定的抑制效果，且在细胞水平具有高效低毒的抑制效果，能对STAT3信号依赖的细胞具有较好的抑制作用。由于Brevilin A本身是天然中草药的成分，其副作用在可控范围之内，故作为JAK-STATs信号抑制剂有很大潜力开发成药物，治疗由于JAK-STATs持续活化造成的相关疾病。

发明内容

本发明的目的是提供一种 Brevilin A 的新用途——Brevilin A作为JAK-STATs 信号抑制剂的应用。

下面以STAT3为例，通过细胞实验来说明Brevilin A对JAK-STATs信号的抑制作用。

仪器：PerkinElmer Victor3 荧光/化学发光分析仪， Biorad 蛋白质电泳及转印系统，Biorad荧光定量PCR分析仪。

试剂：萤火虫荧光素酶测定试剂盒以及RNA反转录试剂盒购自Promega公司；IL-6购自Peprotech公司；Brevilin A购自BioBioPha 公司；DMEM（高糖）及胎牛血清购自Hyclone（Thermo公司）；各种抗体购自Cell Signaling Technology公司；总RNA提取试剂盒购自天根公司；MTT购自上海生工。

1、不同浓度 BrevlinA 对 STAT3 活性的抑制实验