[发明专利]拟除虫菊酯类农药降解菌及其分离纯化方法和应用

权利要求书

1.一种拟除虫菊酯类农药降解菌，其特征在于：该菌株为HS-24菌株，分类命名为噬甲基菌（Methylophaga sp.），于2012年4月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.6046，该菌株的16S rRNA的Genbank登陆号为JX087925。

2.根据权利要求1所述的拟除虫菊酯类农药降解菌，其特征在于：该菌株的生物学特征为革兰氏染色阴性，为杆菌，精氨酸双水解试验、赖氨酸脱羧酶试验、V-P反应、明胶液化试验阳性，β-半乳糖甙酶、鸟氨酸脱羧酶、色氨酸脱氨酶试验、尿素酶试验、吲哚试验、H₂S反应均为阴性，不可以利用蔗糖。

3.根据权利要求1所述的拟除虫菊酯类农药降解菌，其特征在于：该菌株海水中生长，最适生长温度25-30 ℃，最适生长pH为7.0-7.8，在固体培养基上，菌落圆形、较薄，呈白色，半透明。

4.一种根据权利要求1所述的拟除虫菊酯类农药降解菌的分离纯化方法，其特征在于具体包括如下步骤：

（1）培养基配制

将氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氯氰菊酯和联苯菊酯分别相应加入1. 5 倍重量的乳化剂，制备成相应的浓乳液，然后将各个浓乳液分别加入到营养培养基中，使氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氯氰菊酯和联苯菊酯终浓度分别为100mg/L，得到富集培养液；

（2）降解菌分离纯化

取500 mL海水样品无菌状态下过滤富集后，加入到含富集培养液的三角瓶中，在温度28 ℃、转速180 rpm的条件下，培养7d，按10%体积接种量转移到新配制的富集培养液中，再在温度28 ℃、转速180 rpm的条件下，培养7 d，取培养基发酵液进行平板划线分离、纯化，直到筛选得到单个菌落，将纯化后的各菌落分别接至新配制的富集培养液中，在温度28 ℃、转速180 rpm的条件下，振荡培养7 d，通过气相色谱-电子捕获器检测各富集培养液中拟除虫菊酯类农药残留量，筛选对氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氯氰菊酯和联苯菊酯5种拟除虫菊酯类农药具有高效降解能力的菌株，即为降解海水环境中拟除虫菊酯类农药的降解菌HS-24菌株。

5.根据权利要求4所述的拟除虫菊酯类农药降解菌的分离纯化方法，其特征在于所述的营养培养基的配制方法如下：蛋白胨5.0 g，磷酸高铁0.01 g，酵母膏1.0 g，过滤海水1000 mL，pH 7.0-7.8，于121 ℃高压蒸汽灭菌20 min后制得。

6.根据权利要求4所述的拟除虫菊酯类农药降解菌的分离纯化方法，其特征在于：所述的乳化剂为吐温-20。

7.一种根据权利要求1所述的拟除虫菊酯类农药降解菌的应用，其特征在于：该菌株可用于海水及沉积物环境中氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氯氰菊酯、联苯菊酯农药的生物降解。

8.根据权利要求7所述的拟除虫菊酯类农药的降解菌的应用，其特征在于：该菌株在pH 7.0-7.8、温度25-30 ℃、拟除虫菊酯类农药浓度100 mg/L条件下对氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氯氰菊酯和联苯菊酯五种拟除虫菊酯类农药的降解能力均达到75%以上。