[发明专利]一种获取循环肿瘤单细胞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及循环肿瘤细胞检测领域。

背景技术

美国肿瘤协会于2006年发表的年度报告指出，目前全世界范围内每3人中就有1人在其一生中会患有某种肿瘤，而且在发展中国家，随着污染程度的增加，患病几率还会高于1/3的比例。

目前全世界用于肿瘤诊断的方法可归为三大类：病理学（活检切片）；影像学（超声、X光、CT或PET等）和血清学（血清肿瘤相关蛋白，如CA-125、CA-199或CEA等），但所有这些方法都有不可避免的缺点，例如灵敏性及特异性差和过于依赖医生的主观判断等。因此目前临床急需一种能够为医生及病人提供准确，快速的肿瘤检测手段。经过长时间的大量研究，美国FDA认证的人外周血循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell，简称CTC）检测目前已被公认为最好及最客观的检测手段之一。目前已有越来越多的国内外医生开始应用此技术作为肿瘤检查的重要辅助手段。不仅于此，CTC检测也被公认为是目前国外新近流行的肿瘤治疗方法—即阻断肿瘤细胞入血转移的唯一有效检测指标。除了上述CTC可作为肿瘤检测手段外，CTC还被证明可成功应用于以下一系列其它方面的用途：(1)体内化疗药物药效的快速评估:相对于每12周一查的CT诊断，CTC在第2周即可显示药效结果，这一点对临床医生及挽救病人生命尤为重要；(2)根据CTC数目，判断病人愈后状况及存活时间：美国Immunicon/Veridex (Johnson & Johnson)公司经过在数百肿瘤病人标本上的严格验证，已可根据治疗前后的CTC数目变化准确地预测乳腺癌、结直肠癌及前列腺癌病人的存活时间，这一点已被美国FDA认证接受，开始在美国众多医院中被广泛应用；(3)肿瘤病人复发的监测与及时诊断：绝大多数的肿瘤复发从根本上讲实际就是肿瘤转移过程，因而通过对治疗后的病人CTC的持续检测，可以达到监测病人肿瘤复发的目的；（4）个体化治疗的体外肿瘤治疗药物筛选；及（5）正常人群体检普查以利于尽可能的肿瘤早期诊断等。除了应用于临床外，CTC亦可应用于众多药厂和科研机构的基础研究，包括寻找新的肿瘤标记物以及开发新的抗肿瘤药物等。

目前美国FDA已于2004年认证了美国上市公司Immunicon/Veridex的CTC检测技术及其临床应用，该技术目前已应用于美国多家医院的循环肿瘤细胞检测。

但是，Immunicon/Veridex的检测技术存在显而易见的缺陷。该技术分离检测肿瘤细胞主要是基于肿瘤细胞表面的一种特定标志物。但众所周知，此肿瘤细胞表面标志物随着肿瘤细胞病理性生长及肿瘤细胞的入血而异常表达。而且，此特定标志物在细胞表面的表达量也因肿瘤不同而差异极大，包括高表达与不表达。所有这些使得该技术在很多情况下捕获不到肿瘤细胞，从而限制了该技术的广泛普及与应用。

发明内容

本发明提供一种便于进行循环肿瘤细胞检测和研究的获取循环肿瘤单细胞的方法。

本发明提供一种获取循环肿瘤单细胞的方法，包括如下步骤：

a)富集体液样本中的循环肿瘤细胞；

b)识别出所述循环肿瘤细胞；

c)分离出单个循环肿瘤细胞。

通过去除体液样本中的非循环肿瘤细胞物质，来提高循环肿瘤细胞的浓度，起到富集循环肿瘤细胞的作用。在富集后的体液样本中，识别筛选出循环肿瘤细胞；将识别筛选出的循环肿瘤细胞一个个分离出来，便于后续的检测和研究。

体液一般指细胞外液。

进一步的，所述步骤a)中，通过去除所述体液样本中的白细胞和红细胞来富集所述循环肿瘤细胞。

进一步的，所述步骤a)中，通过离心技术去除所述体液样本中的红细胞，通过抗体磁珠标记技术去除所述体液样本中的白细胞。

进一步的，所述步骤b)中，利用免疫荧光染色法，用上皮细胞特异性标志识别出所述循环肿瘤细胞。

进一步的，所述步骤b)中，利用微流控芯片，通过比较肿瘤细胞和正常细胞的粒径大小来识别出所述循环肿瘤细胞。

进一步的，所述步骤b)中，利用肿瘤细胞表面标志和荧光原位杂交法识别出所述循环肿瘤细胞。

进一步的，所述步骤c)中，利用微吸管分离出单个循环肿瘤细胞。

本发明的有益效果是：通过将体液样本中的循环肿瘤细胞一个个单独分离出来，从而便于后续的检测和科学研究。

具体实施方式

下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细说明。