[发明专利]检测核酸突变的固相载体、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种检测核酸突变的固相载体，其特征在于，所述固相载体表面固定有MutS；所述MutS含有报告基团；所述报告基团用于指示固相载体上MutS的数量。

2.根据权利要求1所述的检测核酸突变的固相载体，其特征在于，所述报告基团为荧光标记基团或无荧光标记基团。

3.根据权利要求2所述的检测核酸突变的固相载体，其特征在于，所述无荧光标记基团为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、生物素或链霉亲和素。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的检测核酸突变的固相载体，其特征在于，所述固相载体表面为适于包被蛋白的材料。

5.根据权利要求3所述的检测核酸突变的固相载体，其特征在于，所述材料包括天然纤维素、被修饰的纤维素、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚偏氟乙烯、葡萄聚糖、尼龙、聚丙烯酰胺、琼脂糖、橡胶、金属、金属氧化物、玻片、硅片和陶瓷中的至少一种。

6.一种检测核酸突变的试剂盒，其特征在于，包括检测核酸突变的固相载体；所述固相载体表面固定有MutS；所述MutS含有报告基团；所述报告基团用于指示固相载体上MutS的数量。

7.根据权利要求6所述的检测核酸突变的试剂盒，其特征在于，还包括标准品；所述标准品包括阳性标准品和阴性标准品；所述阳性标准品为含有碱基错配或由1至4个核苷酸缺失或插入引起的错配的双链核苷酸分子；所述阴性标准品为完全互补的双链核苷酸分子。

8.根据权利要求6所述的检测核酸突变的试剂盒，其特征在于，还包括用于扩增特定区域的特异性引物。

9.根据权利要求6至8中任一项所述的检测核酸突变的试剂盒，其特征在于，所述报告基团为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、生物素或链霉亲和素；所述试剂盒还包括显色试剂；所述显色试剂，用于与所述报告基团反应进而指示固相载体上MutS的数量。

10.一种基于权利要求1所述的检测核酸突变的固相载体检测核酸突变的方法，其特征在于，所述MutS所含有的报告基团为荧光标记基团或无荧光标记基团；所述荧光标记基团的荧光标记与待测样品携带的荧光标记不同；所述方法包括以下步骤：

A.将带有荧光标记的待测样品和阴性对照品混合，变性，退火，得带荧光标记的退火产物；所述阴性对照品为完全互补的双链核酸分子，该核酸分子含有与待测样品的待检测区域的野生型序列完全相同的核酸序列；

B.将带荧光标记的退火产物加至检测核酸突变的固相载体上，使带荧光标记的退火产物中的存在错配的退火产物与固相载体上的MutS结合，洗涤除去未结合至固相载体上的退火产物；

C.检测与固相载体结合的退火产物的荧光标记和固相载体上的MutS的报告基团，以确定待测样品中是否存在突变。

11.根据权利要求10所述的检测核酸突变的方法，其特征在于，所述步骤C包括：

C1.荧光扫描步骤B的产物，初步确定待测样品中是否含有突变；

C2.对MutS上的报告基团进行检测，以确定固相载体上MutS的数量；

C3.根据步骤C1和C2的结果确定待测样品中是否存在突变。

12.根据权利要求10所述的检测核酸突变的方法，其特征在于，步骤A之前包括步骤A0.利用带荧光标记的特异性引物对源核酸进行扩增，得带荧光标记的待测样品；或利用带荧光标记的核苷酸对源核酸进行末端标记，得带荧光标记的待测样品。

13.根据权利要求10至12中任一项所述的检测核酸突变的方法，其特征在于，所述报告基团为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、生物素或链霉亲和素，所述固相载体表面的材料包括硝酸纤维素膜、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚偏氟乙烯和尼龙中的至少一种。

14.根据权利要求13所述的检测核酸突变的方法，其特征在于，所述步骤C包括：

C1.荧光扫描步骤B的产物，初步确定待测样品中是否含有突变；

C2.利用显色试剂对MutS上的报告基团进行检测，以确定固相载体上MutS的数量；所述显色试剂，用于与所述报告基团反应并指示固相载体上MutS的数量；

C3.根据步骤C1和C2的结果确定待测样品中是否存在突变。