[发明专利]短链脱氢酶CPE基因、编码酶、载体、重组工程菌及应用

权利要求书

1.一种短链脱氢酶CPE基因，其特征在于所述基因的核苷酸序列为SEQID No.1所示。

2.一种由权利要求1所述短链脱氢酶CPE基因编码的短链脱氢酶CPE。

3.如权利要求2所述短链脱氢酶CPE的氨基酸序列为SEQ ID No.2所示。

4.一种含有权利要求1所述短链脱氢酶CPE基因的重组载体。

5.一种含有权利要求1或4所述短链脱氢酶CPE基因或重组载体的重组基因工程菌。

6.一种权利要求1所述短链脱氢酶CPE基因在制备重组短链脱氢酶CPE中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述的应用为：构建含有所述短链脱氢酶CPE基因的重组载体，将所述重组载体转化至大肠杆菌中，获得的重组基因工程菌进行诱导培养，培养液分离纯化获得含有重组短链脱氢酶CPE的菌体细胞。

8.一种由权利要求1所述短链脱氢酶CPE基因编码的短链脱氢酶CPE在不对称还原羰基化合物中的应用，其特征在于所述的应用为：将含有短链脱氢酶CPE基因的基因工程菌发酵培养获得的酶作为酶源与二甲基亚砜、pH值7.0的PBS缓冲液、pH值为7.0的10mg/ml还原型辅酶NADPH的PBS缓冲液、1.5mol/L的葡萄糖水溶液和pH值为7.0的0.0075mg/ml葡萄糖脱氢酶的PBS缓冲液混合，以4-氯乙酰乙酸乙酯作为底物构成反应体系，在30℃、180rpm条件下摇床转化反应20h，反应完全后，将反应液用乙酸乙酯萃取，取有机层用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液即为含S-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的粗品，所述粗品经纯化获得S-4-氯-3-羟基丁酸乙酯；所述酶源来自于含短链脱氢酶CPE基因的重组基因工程菌发酵培养后获得的含湿菌体发酵液离心，取沉淀进行超声破碎后再离心获得的上清液，所述上清液的体积用量以含湿菌体发酵液中湿菌体的质量计为40mg/ml底物，所述反应体系中底物的初始体积浓度为1%，所述二甲基亚砜与底物的体积比为15：1，PBS缓冲液与底物的体积比为40：1、还原型辅酶NADPH的PBS缓冲液与底物的体积比为5：1，葡萄糖水溶液与底物的体积比为10：1，葡萄糖脱氢酶的PBS缓冲液与底物的体积比为5：1。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于所述酶源的获得方法为：将含短链脱氢酶CPE基因的重组基因工程菌接种至含100mg/ml氨苄青霉素的LB液体培养基a中，37℃震荡培养12h后，获得培养液，将培养液以体积浓度1%的接种量接种到含100mg/ml氨苄青霉素的LB液体培养基b中，37℃震荡培养至OD值为0.6，加入IPTG至终浓度为1mmol/L，25℃诱导表达15h，将获得的诱导培养液离心，取沉淀置于pH=7.0的PBS缓冲液中超声破碎细胞10min后在4℃、12000rpm/min离心10min，取上清液，即为酶源。