[发明专利]透明质酸/明胶/硫酸软骨素骨修复仿生支架的制备方法

权利要求书

1.透明质酸/明胶/硫酸软骨素骨修复仿生支架的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）在透明质酸的2-(N-吗啡啉）乙磺酸缓冲液中，加入4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐活化剂后搅拌0.5~1h，再逐滴加入糠胺，反应24~48h，透析3~5天，冷冻干燥得到改性透明质酸固体；

（2）在明胶水溶液中加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺搅拌均匀后，加入呋喃甲酸，反应24~48h，透析3~5天，冷冻干燥得到改性明胶固体；

（3）将步骤（1）中得到的改性透明质酸固体和步骤（2）中得到的改性明胶固体共同溶解于2-(N-吗啡啉）乙磺酸缓冲液中得到混合溶液；

（4）将双端基马来酰亚胺聚乙烯醇溶解于2-(N-吗啡啉）乙磺酸缓冲液中得到双端基马来酰亚胺聚乙烯醇溶液；

（5）将步骤（4）得到的双端基马来酰亚胺聚乙烯醇溶液加入步骤（3）得到的混合溶液中，搅拌均匀后，在37~50℃水浴中进行点击化学反应直至形成透明的交联水凝胶状态；

（6）将步骤（5）得到的水凝胶浸泡在硫酸软骨素钠盐的2-(N-吗啡啉）乙磺酸缓冲液中，加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺搅拌反应24~48h后，得到透明质酸/明胶/硫酸软骨素软骨修复仿生支架。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述透明质酸与2-(N-吗啡啉）乙磺酸缓冲液的质量体积比为0.2~0.8%；所述透明质酸、糠胺与4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐的摩尔比为1:2:（2~6）。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述明胶水溶液的浓度为0.5~1.5% w/v；所述碳二亚胺与N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为3:2，且碳二亚胺与N-羟基琥珀酰亚胺的总质量为明胶质量的4/5；所述呋喃甲酸与明胶的质量比为（1~3）：4。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）和步骤（2）中，所述透析的截留分子量为14000；所述冷冻干燥的步骤为：先于-20~-70℃冷冻24~48h成冰状，然后继续冻干48~72h。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述混合溶液中改性透明质酸固体的浓度为1~2% w/v，改性明胶固体的浓度为0.5~1.5% w/v。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述双端基马来酰亚胺聚乙烯醇的质量与改性透明质酸固体和改性明胶固体的质量之和的比值为1:2~2:1。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，所述硫酸软骨素钠盐与2-(N-吗啡啉）乙磺酸缓冲液的质量体积比为1~3%；所述碳二亚胺与N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为3:2，且碳二亚胺与N-羟基琥珀酰亚胺的总质量为硫酸软骨素钠盐质量的4/5。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述2-(N-吗啡啉）乙磺酸缓冲液的浓度为100mmol/L，pH=5.5。