[发明专利]一种鉴定胡椒种质资源的方法

权利要求书

1.一种鉴定胡椒种质资源的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、选取标准胡椒品种中的一种或两种以上，分别进行DNA提取，然后采用SEQ ID NO:1所示序列的ISSR引物进行PCR扩增，所得扩增产物进行凝胶电泳检测，根据凝胶电泳图结果以标准胡椒品种编号和扩增条带数最多的标准胡椒品种的条带存在位点编号为横、纵坐标，在每一个横、纵坐标交结处记录标准胡椒品种条带的检测结果，将有扩增条带的标记为有条带，无扩增条带的标记为无条带，得到标准胡椒品种的ISSR指纹图谱；

步骤2、提取待测胡椒品种的DNA，采用SEQ ID NO:1所示序列的ISSR引物进行PCR扩增，将所得到的扩增产物进行凝胶电泳检测，根据凝胶电泳图结果以待测胡椒品种编号和步骤1所述扩增条带数最多的标准胡椒品种的条带存在位点编号为横、纵坐标，在每一个横、纵坐标交结处记录待测胡椒品种条带的检测结果，将有扩增条带的标记为有条带，无扩增条带的标记为无条带，得到待测胡椒品种的ISSR指纹图谱，然后与所述标准胡椒品种的ISSR指纹图谱进行比对判断。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述标准胡椒品种为华山蒟、蒌叶、粗穗胡椒、海南蒟、荜菝、假蒟、大叶蒟、短蒟、斜叶蒟、毛蒟、山蒟、顶花胡椒、柬印93、柬埔寨小叶种、印尼大叶种胡椒、古晋胡椒、73F5胡椒、兴热1号胡椒、大山胡椒、云选1号胡椒和班尼约尔1号胡椒。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述PCR扩增体系为：

反应总体积为25μL，其中Mg²⁺浓度为2mmol/L、dNTPs浓度为200μmo/L、引物浓度为2μmol/L、胡椒品种的DNA用量为100ng、Taq DNA聚合酶用量为1U。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述PCR扩增程序为：

94℃预变性3min；

94℃变性2min、50℃复性1min、72℃延伸3min，循环35次；

72℃延伸7min，4℃保存。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述标记为有条带为标记为1。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述标记为无条带为标记为0。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述凝胶电泳为琼脂糖凝胶电泳。

8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述琼脂糖凝胶电泳采用胶浓度为1.2%并包含GoodView核酸凝胶染色剂的琼脂糖凝胶。