[发明专利]布氏杆菌检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种布氏杆菌检测试剂盒，其特征在于，所述的布氏杆菌检测试剂盒包括以布氏杆菌的OMP25基因为靶基因、基于环介导恒温扩增技术设计的两对引物：内引物FIP/BIP和外引物F3/B3。

2.根据权利要求1所述的布氏杆菌检测试剂盒，其特征在于，所述的两对引物为

外引物F3：

CGTCGGCTACGACCTGAA

外引物B3：

ACCGGCCAGATCATAGTTCT

内引物FIP：

TCGTCCAAGCCGTTGTTAAGCTttttCCCGGTTATGCCGTACCT

内引物BIP：

GTGCCGGTCTCGAAGCCAAGttttTGTTGCCGTACTGGGTGTA

或

外引物F3：

ATTGCCGGTTCGCAGATC

外引物B3：

GCGGATATCCTGCGTGTC

内引物FIP：

TCAGCTTGGCTTCGAGACCGttttCTTAACAACGGCTTGGACGA

内引物BIP：

GGCCGCGTTGAGTACCGTTAttttAGCTTGTTGCGAACAGTCG。

3.根据权利要求1所述的布氏杆菌检测试剂盒，其特征在于，所述的布氏杆菌检测试剂盒还包括BstDNA聚合酶、反应液、稳定液、样品预处理液、显色液和阳性对照液。

4.根据权利要求3所述的布氏杆菌检测试剂盒，其特征在于，

所述的BstDNA聚合酶：酶浓度4-10U/μL；

所述的反应液含：1.6～2mmol/L dNTP、20～25mmol/L Tris-HCl、10～12.5mmol/L KCl、10～12.5mmol/L（NH₄）₂SO₄、8～10mmol/L MgSO₄、0.1～0.125体积％TritonX-100、0.8～1mol/L甜菜碱；

所述的样品预处理液含：10～20mmol/L pH8.0的Tris-HCl、1～2mmol/LEDTA和1～1.2体积%Triton X-100；

所述的显色液为SYBR Green I或Eva Green；

所述稳定液为石蜡油；

所述的阳性对照液为布氏杆菌基因组DNA；

所述的内引物FIP/BIP各为1.2～2.0μmol/L，外引物F3/B3的浓度各为0.2～0.25μmol/L。

5.根据权利要求4所述的布氏杆菌检测试剂盒，其特征在于，

所述的BstDNA聚合酶：酶浓度8U/μL；

所述的反应液含：2mmol/L dNTP、25mmol/L Tris-HCl、12.5mmol/L KCl、12.5mmol/L（NH₄）₂SO₄、10mmol/L MgSO₄、0.125体积％TritonX-100、1mol/L甜菜碱；

所述的样品预处理液含：20mmol/L pH8.0的Tris-HCl、2mmol/L EDTA和1.2体积%Triton X-100；

所述的显色液为SYBR Green I；

所述的内引物FIP/BIP的浓度为1.6μmol/L；

所述的外引物F3/B3的浓度为0.2μmol/L。

6.根据权利要求3、4或5所述的布氏杆菌检测试剂盒，其特征在于，所述的布氏杆菌检测试剂盒还包括反应管，所述的反应管由管体和管盖两部分组成，管体内腔的下部设有将其分隔成A、B两个空腔的纵向延伸的隔板。

7.根据权利要求6所述的布氏杆菌检测试剂盒，其特征在于，所述的A、B两个空腔中分别装有工作液或显色液，两个空腔中的液体上层均由稳定液封存，所述工作液为反应液和BstDNA聚合酶混合而成。