[发明专利]多肽内二硫键的定位方法有效
| 申请号： | 201210214192.7 | 申请日： | 2012-06-27 |
| 公开（公告）号： | CN102721734A | 公开（公告）日： | 2012-10-10 |
| 发明（设计）人： | 康旭;宓鹏程;马亚平;袁建成 | 申请（专利权）人： | 深圳翰宇药业股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N27/62 | 分类号： | G01N27/62 |
| 代理公司： | 深圳市科吉华烽知识产权事务所 44248 | 代理人： | 韩英杰 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市南山区*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 多肽 二硫键 定位 方法 | ||
1.一种多肽内二硫键的定位方法，包括以下步骤：
1）制备部分还原产物：将待测多肽与二硫苏糖醇在高温下孵育10-60min,加入TCEP反应5-60min,分离得到部分还原产物；
2）制备烷基化的部分还原产物：将部分还原产物与碘乙酰胺在高温下反应5-60min，使二硫键断开部位的巯基烷基化；分离得到烷基化的部分还原产物；
3）断开所有二硫键：将烷基化的部分还原产物与二硫苏糖醇在高温下反应5-60min，使烷基化的部分还原产物中所有二硫键断开；
4）：用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱和电喷雾-四极杆-飞行时间质谱，采用纳喷技术结合碰撞诱导解离方法对断开所有二硫键的烷基化多肽进行检测分析，根据氨基酸被烷基化的情况以及多肽的以及一级结构定位二硫键连接结构；
所述的高温指35-75℃。
2.一种如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）中的待测多肽与二硫苏糖醇的用量质量比为：1:2-1:4。
3.一种如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）中的待测多肽与TCEP的用量质量比为：2:1-4:1。
4.一种如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤1）中的待测多肽与TCEP的用量质量比为：2:1-4:1。
5.一种如权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于：步骤2）中的部分还原产物与碘乙酰胺的用量比为每100μL部分还原产物加入20-30μL 1.0M碘乙酰胺溶液。
6.一种如权利要求1-4任意一项所述的方法，其特征在于：步骤2）中的烷基化的部分还原产物与二硫苏糖醇的用量质量比为：1:2-1:3。
7.一种如权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤2）中的烷基化的部分还原产物与二硫苏糖醇的用量质量比为：1:2-1:3。
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