[发明专利]抗蓝舌病病毒VP7蛋白的单克隆抗体，分泌该抗体的杂交瘤细胞株及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体，尤其涉及一株分泌抗蓝舌病病毒VP7蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其所分泌的单克隆抗体。本发明还涉及上述杂交瘤细胞株和单克隆抗体在制备诊断蓝舌病病毒感染动物试剂中的应用，属于蓝舌病的防治领域。 

背景技术

蓝舌病（Bluetongue disease,BT）是由蓝舌病病毒（Bluetongue disease virus，BTV）引起的，通过吸血昆虫传播的反刍动物病毒性传染病,以口腔、鼻腔和胃肠道黏膜发生溃疡性炎症变化为特征。BTV为双股RNA病毒，其基因组包含10个节段，大小约为19kb。BTV为呼肠孤病毒科（Reoviridae）环状病毒属（Orbivirus）蓝舌病病毒亚群（Bluetingue virus subgroup）的成员之一，环状病毒属共有14个亚群，其中蓝舌病病毒亚群与鹿出血症病毒亚群有较强的交叉反应性。BT最早于1876年发现于南非的绵羊，由于发病绵羊持续高热，口腔出现溃疡损伤，口腔粘膜及舌头发蓝，因此，于1906年提议定名为“蓝舌病”，牛的BT发现于1943年。BTV几乎可以感染所有的反刍动物，包括家养和野生的牛、山羊和某些野生动物。牛、山羊、鹿及羚羊等野生反刍动物可长期带毒，并在疾病流间歇期扮演着病毒宿主的角色。而吸血昆虫，特别是库蠓是其主要传播媒介。1940年前本病仅限于撒哈拉以南的非洲大陆，到40年代已蔓延至中东一些国家和地区，例如：塞浦路斯、叙利亚、伊拉克、土耳其、以色列和巴勒斯坦。1948年美国报道此病。70年代后期本病广泛分布于热带、亚热带国家。1956～1957年在欧洲尤其是西班牙和葡萄牙流行。1978在澳大利亚的库蠓体内分离到BTV。目前，热带和亚热带地区绝大多数国家的易感动物都可能感染BTV或与之密切相关的病毒。我国于1979年在云南师宗首先发现本病并分离出BTV，从而确定了本病在国内的存在，随后在湖北（1983）、安徽（1985）、四川（1988）、甘肃（1990）、山西（1991）等29个省均检出BTV血清学阳性牲畜。近年来，随着全球气候变暖，BT在许多 国家相继爆发，且分布范围不断扩大。2006年8月，德国、比利时、法国、荷兰等首次发现牛感染BT，2007年7月，英国、法国、意大利等国爆发本病。世界动物卫生组织（OIE）通报，2008年3月～4月，法国、意大利等国爆发了BT，2009年1月～12月，英国、法国、意大利、澳大利亚、希腊、以色列、丹麦、捷克、瑞典、挪威、西班牙、德国、奥地利、葡萄牙、匈牙利、荷兰、阿曼、阿尔及利亚、摩洛哥和突尼斯等国先后爆发BT。 

由于BTV有24个血清型，各个国家血清型分布不均一，到目前为止，并没有有效的疫苗来防治本病，所以，早期准确诊断，早期预防，是防止本病爆发的最有效方法。鉴于我国已在多数省份和地区检测到该病，加之国际贸易中本病存在的风险，故我国急需加强对该病的研究，做好可对其进行防控和检测的技术储备，特别是建立BT的实验室诊断方法尤为重要。 

VP7是一种极端疏水的蛋白质，具有349个氨基酸，比较VP7蛋白的一级结构，发现各血清型BTV-VP7蛋白中94%以上的氨基酸保守，包括第255位的赖氨酸。氨基酸序列的保守决定了VP7是群特异性抗原这一特征。目前已有实验证实了VP7蛋白存在绝对保守区域，更为重要的是，VP7是病毒核心颗粒上的主要暴露蛋白，至少有两个表位暴露于病毒表面，这些特性均表明VP7可以作为检测BT的理想靶抗原。 

发明内容

本发明的目的之一是提供一株能够分泌抗蓝舌病病毒VP7蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株； 

本发明的目的之二是提供一种可与24个血清型蓝舌病病毒（BTV）发生特异性反应，而与IBAV、CV、AKAV、BVDV、IBRV、BRV、RV、BEV和FMDV不发生反应的单克隆抗体； 

本发明的目的之三是提供以上所述的杂交瘤细胞株及其分泌的抗体在制备诊断或检测蓝舌病病毒（BTV）感染动物试剂中的应用。 

本发明是通过以下技术方案来实现的：