[发明专利]一种基于金磁微粒的化学发光免疫学检测小分子物质的方法

权利要求书

1.一种基于金磁微粒的化学发光免疫学检测小分子物质的方法，包括以下步骤：

(1)包被

以金磁微粒作为免疫反应和固相分离的载体，取与待检小分子物质相应的小分子物质合成抗原，将其偶联在金磁微粒的表面；

(2)封闭

用封闭液封闭金磁微粒表面未与抗原结合的空白位点；然后磁性分离，弃上清，用清洗缓冲液清洗后悬于保存缓冲液中保存备用；

(3)与待测物反应

将待检标本、抗待检小分子物质的单抗、能与单抗发生特异性结合的酶标二抗加入经过步骤(2)封闭后的结合有小分子物质合成抗原的金磁微粒中反应，包被在金磁微粒表面的抗原与待检标本共同竞争有限的抗体位点，形成特异性抗原-抗体-酶标二抗复合物；

(4)清洗

用清洗缓冲液清洗抗原-抗体-酶标二抗复合物，磁性分离，弃上清；

(5)检测

向经过步骤(4)处理后形成的抗原-抗体-酶标二抗复合物中加入化学发光底物液，在化学发光底物液加入后的3～50分钟内测量各孔的发光强度；发光强度与待测样本的浓度成反比关系。

2.根据权利要求1所述的基于金磁微粒的化学发光免疫学检测小分子物质的方法，其特征在于：

步骤(1)具体包括以下步骤：

(1.1)预处理：取金磁微粒，用偶联缓冲液清洗1～3遍；

(1.2)偶联：将小分子物质合成抗原与偶联缓冲液混合，将所得混合液加入经过预处理的金磁微粒中，置于摇床，在4～37℃，100～300rpm条件下充分反应，反应完后，置于磁性分离器上，磁性分离，弃上清；

(1.3)清洗：用清洗缓冲液清洗2～5次，磁性分离，弃上清；

步骤(2)中用封闭液进行封闭的过程具体是：在步骤(1)的产物中加入封闭液，置于摇床中，在4～37℃条件下，以100～300rpm的转速反应1～2小时，封闭金磁微粒表面未与抗原结合的空白位点；

步骤(3)反应的条件为：将待检标本、抗小分子物质的单抗、酶标二抗加入金磁微粒中，置于摇床，在4～37℃条件下，以100～300rpm的转速反应0.5～1小时。

3.根据权利要求2所述的基于金磁微粒的化学发光免疫学检测小分子物质的方法，其特征在于：

步骤(1.2)偶联缓冲液选自以下缓冲液中的任一种：

pH＝3.6～5.6，浓度为0.005M～1M的醋酸盐缓冲液、

pH＝5.0～8.0，浓度为0.5×～10×的磷酸盐(PBS)缓冲液、

pH＝7.0～9.0，浓度为0.005M～1M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液、

pH＝9.0～11，浓度为0.005M～1M的碳酸盐(CBS)缓冲液、

pH＝3.0～7.0，浓度为0.005M～1M的柠檬酸盐缓冲液；

步骤(1.3)中采用的清洗缓冲液是浓度为0.005M～1M的Tris-HCl缓冲液或摩尔浓度为0.5×～10×的PBS缓冲液。