[发明专利]脂磷壁酸ELISA检测试剂盒及其制备技术

权利要求书

1.脂磷壁酸ELISA检测试剂盒，其特征在于：利用从金黄色葡萄球菌发酵物提取的脂磷壁酸抗原免疫Balb/c小鼠，制备单克隆抗体L，经检测为IgG免疫球蛋白，抗体效价为1×10⁶。经小鼠腹腔注射获得腹水，采用饱和硫酸铵沉淀与亲和层析提取纯化抗体。应用脂磷壁酸作为包被抗原，获得的抗体L作为酶标抗体，制备成竞争法ELISA试剂盒。本发明改变了费时费力的血培养方法检测金黄色葡萄球菌的现状，采用灵敏度高特异性强的酶联免疫方法，缩短检测时间，作为临床诊断的参考之一。

2.如权利要求1所述的脂磷壁酸抗原购于Sigma-Aldrich公司。

3.如权利要求1所述的脂磷壁酸抗原免疫Balb/c小鼠剂量为75μg/只，注射体积0.5ml，共免疫4次。

4.如权利要求1所述的脂磷壁酸抗体提取纯化的步骤为饱和硫酸铵沉淀、重悬后PBS透析、经Protein G亲和层析纯化。

5.如权利要求4所述的脂磷壁酸抗体提取纯化的第一步为饱和硫酸铵分级沉淀，浓度分别为50％、33％，4℃过夜后，10000rpm，4℃离心20min，0.01M PBS重悬沉淀至原体积。

6.如权利要求4所述的脂磷壁酸抗体提取纯化的第二步为透析，透析液采用pH值为7.4、0.01M的PBS，透析时间为48小时。

7.如权利要求4所述的脂磷壁酸抗体提取纯化的第三步为亲和层析，采用Protein G纯化柱，pH值为7.0、0.02M的PB平衡液，0.1M、PH 2.7的Glycine-HCl洗脱液。纯化后的抗体于-20℃保存备用。

8.如权利要求1所述的使用抗体L建立脂磷壁酸检测试剂盒，进行了包被抗原浓度、酶标抗体稀释度、血清标本前处理的优化，最终确立的检测条件为：血清标本十倍稀释后煮沸5min，孔外与酶标抗体37℃温育1小时后加入已包被脂磷壁酸抗原的酶标板中，37℃温育1小时，洗板5次，每次2min，加显色液反应20min后终止，经酶标仪测定其OD值。

9.如权利要求1所述的脂磷壁酸ELISA检测试剂盒检测范围为0.2-2μg/ml，本产品为液体试剂无需冷冻干燥，4℃冷藏有效期半年。