[发明专利]一种检测鸡组织中脱氢乙酸残留量的方法

说明书

技术领域

本发明属于兽药残留检测领域，具体涉及一种检测鸡组织（肌肉、肝脏和肾脏）中脱氢乙酸残留量的方法。

背景技术

脱氢乙酸作为一种防腐剂，在食品行业中应用较广，现也作为饲料添加剂用于防霉。目前国内外关于脱氢乙酸含量检测的报道，多是针对饮料、烘焙糕点及淹菜等食品，检测方法主要有紫外分光光度度法、气相色谱－氢火焰离子化检测法、高效液相色谱－紫外检测法。但有关动物性组织中脱氢乙酸测定的方法未见报道。

发明内容

为了能检测鸡组织中脱氢乙酸残留量，本发明提供了一种检测鸡组织（肌肉、肝脏和肾脏）中脱氢乙酸残留量的方法，能检测鸡组织中脱氢乙酸的残留量。

本发明所采用的技术方案是：一种检测鸡组织中脱氢乙酸残留量的方法，是将鸡组织样品经过提取、净化后，以甲醇-0.02%乙酸铵溶液为流动相,高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UVD）检测；液相色谱条件为：色谱柱，Eclipse Plus C₁₈，5μm，250mm×4.6mm i.d.；流动相，甲醇-0.02%乙酸铵溶液（20/80,V/V）；流速：1.0mL·min^-1；检测波长：290nm；柱温：30℃；进样体积：20μL。

本发明中鸡组织样品中脱氢乙酸的提取和净化推荐使用乙腈超声波提取，正己烷及PAX固相萃取柱净化。具体操作是：将鸡组织绞碎后称量，加乙腈10mL匀浆并用乙腈洗涤匀浆机刀片。乙腈匀浆液超声波提取10min后4000rpm离心10min，收集上清液，残渣用乙腈10mL重复提取，合并上清液并加入正丙醇3mL后于40℃旋转蒸发至近干，加入乙腈2.0mL漩涡振荡溶解残渣。若为肌肉样品，残渣溶解的乙腈液置-20℃冰冻15min，4000rpm离心10min，上清液过0.22μm有机滤膜，供HPLC检测用。若为肾脏样品，则加入正己烷4mL涡旋混合5min，4000rpm离心10min，弃去正己烷，并用正己烷重复净化三次后，乙腈相过0.22μm有机滤膜，供HPLC检测用。若为肝脏样品，加入正己烷4mL涡旋混合5min，4000rpm离心10min，弃去正己烷，乙腈相加至已分别经甲醇5mL和1%氨水溶液5mL活化、平衡后的PAX小柱，自然流出。依次用3%氨水溶液5mL和甲醇5mL淋洗小柱，然后用5%乙酸甲醇溶液5mL洗脱，收集洗脱液并用氮气吹干。残渣用乙腈2.0mL溶解后，过0.22μm有机滤膜，供HPLC检测用。

本发明方法所测得鸡组织中脱氢乙酸的LOD为0.05mg·kg^-1；LOQ为0.2mg·kg^-1，能够满足关于动物性食品中脱氢乙酸药物残留分析的要求。

附图说明

图1是1mg·L^-1脱氢乙酸标准溶液色谱图。

图2是肌肉组织添加脱氢乙酸标准溶液色谱图；A：空白肌肉;B：空白肌肉＋0.5mg·kg^-1脱氢乙酸。

图3是肾脏添加脱氢乙酸标准溶液色谱图；C：空白肾脏;D：空白肾脏＋1mg·kg^-1脱氢乙酸。图4是肝脏添加脱氢乙酸标准溶液色谱图；E：空白肝脏;F：空白肝脏＋1mg·kg^-1脱氢乙酸。

具体实施方式

在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。

下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。

在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。

本发明中所涉及到的溶液百分浓度，除特别说明外均为体积百分浓度。

1.实验鸡的饲养和样品采集

随机选取30日龄黄羽肉鸡6只，体重1.25±0.40kg，连续7d饲喂不含任何抗菌药物的全价饲料，自由饮水。鸡于第8d处死，分别采集肌肉、肝脏和肾脏组织作为空白对照样品，-20℃保存。

2.样品处理

本发明提取、萃取、净化步骤：