[发明专利]与二氢黄豆苷元合成有关的酶

权利要求书

1.一种多肽，所述多肽具有以黄豆苷元为底物合成二氢黄豆苷元的活性。

2.如权利要求1所述的多肽，所述多肽以NADPH或NADH作为辅酶显示所述活性。

3.如权利要求1或2所述的多肽，所述多肽的最适温度在30℃左右。

4.如权利要求1～3中任一项所述的多肽，所述多肽的最适pH为7.0。

5.如权利要求1～4中任一项所述的多肽，所述多肽通过SDS-PAGE测定的分子量约为70kDa。

6.如权利要求1～5中任一项所述的多肽，所述多肽为来自拟杆菌、链球菌、或乳球菌的多肽。

7.如权利要求1～6中任一项所述的多肽，所述多肽为下述(Aa)～(Ac)中的任一种，

(Aa)多肽，由序列号1所示的氨基酸序列组成；

(Ab)多肽，由在序列号1所示的氨基酸序列中，取代、缺失、插入及/或添加选自下述位置的1～15个氨基酸得到的氨基酸序列组成，并且具有以黄豆苷元为底物合成二氢黄豆苷元的活性，

所述位置为第45位的亮氨酸、第80位的天冬酰胺、第167位的缬氨酸、第231位的天冬氨酸、第233位的异亮氨酸、第435位的精氨酸、第459位的天冬氨酸、第462位的缬氨酸、第528位的精氨酸、第540位的丝氨酸、及第639位的异亮氨酸、及它们的前后3个的氨基酸的位置；

(Ac)多肽，由与序列号1所示的氨基酸序列具有98％以上同一性的氨基酸序列组成，并且具有以黄豆苷元为底物合成二氢黄豆苷元的活性。

8.如权利要求1～7中任一项所述的多肽，所述多肽为由序列号1所示的氨基酸序列组成的多肽、由序列号2所示的氨基酸序列组成的多肽或由序列号3所示的氨基酸序列组成的多肽。

9.一种二氢黄豆苷元的制备方法，所述制备方法包括使权利要求1～8中任一项所述的多肽、以及NADPH及/或NADH作用于黄豆苷元的步骤。

10.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码权利要求1～8中任一项所述的多肽。

11.如权利要求10所述的多核苷酸，所述多核苷酸为下述(Ad)～(Af)中的任一种多核苷酸：

(Ad)多核苷酸，由序列号4所示的核苷酸序列组成；

(Ae)多核苷酸，编码由序列号1所示的氨基酸序列组成的多肽；

(Af)多核苷酸，与上述(Ad)多核苷酸具有97.6％以上的同一性，并且编码具有以黄豆苷元为底物生成二氢黄豆苷元活性的多肽。

12.如权利要求10或11所述的多核苷酸，所述多核苷酸为由序列号4所示的核苷酸序列组成的多核苷酸、由序列号5所示的核苷酸序列组成的多核苷酸、或由序列号6所示的核苷酸序列组成的多核苷酸。

13.一种表达载体，所述表达载体含有权利要求10～12中任一项所述的多核苷酸。

14.一种重组细胞，所述重组细胞是由权利要求13所述的表达载体转化得到的。

15.一种多肽的制备方法，所述制备方法包括培养权利要求14所述的细胞，得到具有以黄豆苷元为底物生成二氢黄豆苷元活性的多肽的步骤。

16.一种二氢黄豆苷元的制备方法，所述制备方法包括使权利要求14所述的细胞作用于黄豆苷元的步骤。

17.一种抗体，所述抗体与权利要求1～8中任一项所述的多肽具有亲和性。

18.一种二氢黄豆苷元合成用试剂盒，所述试剂盒含有权利要求14所述的细胞、及黄豆苷元。