[发明专利]一种从埃及槲果中提取纯化总甾体皂苷及其单体的分离方法

说明书

技术领域

本发明属于中药化学领域，涉及一种从埃及槲果中提取纯化总甾体皂苷及其单体的分离方法。

背景技术

埃及槲果为槲果科（Balanitaceae）植物埃及槲果Balanites aegyptica Del.种子。EP1287829-A1中将10-80份埃及槲果和10-90份云实焙烤，浸在圣罗勒叶提取液中，干燥等步骤，所得提取物可用于制作镇静药、强心剂、治疗睡眠、疼痛、头痛、控制心悸和防止尿路感染，用作利尿剂，可减轻浮肿。其主要化学成分为甾体皂苷类化合物，包括槲果素4、槲果素5、槲果素7，药理研究表明这些化合物均具有显著的抗肿瘤作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种从埃及槲果中提取纯化总甾体皂苷及其单体的分离方法，是一种简单快捷、易于控制、环境污染小的分离方法。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种从埃及槲果中提取纯化总甾体皂苷及其单体的分离方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将埃及槲果种子烘干粉碎，将粉末与助溶剂按质量体积比1:2放入超临界CO₂萃取器中，以无水乙醇为夹带剂，调节萃取釜参数，使萃取釜温度为45-65℃，压力为30-38MPa，CO₂流量控制在20-25kg/h，萃取时间为3-4h；分离温度为40-50℃，分离压力为6-12MPa，收集总甾体皂苷萃取物；

（2）萃取物加水稀释后，通过大孔树脂柱，分别用蒸馏水和20%乙醇洗脱后，用40-70%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩成浸膏，低温干燥得埃及槲果总甾体皂苷；

（3）将埃及槲果总甾体皂苷经高速逆流色谱分离纯化，最后采用重结晶的方法精制，得到槲果素4、槲果素5、槲果素7单体化合物。

所述步骤（1）中助溶剂为加有表面活性剂的助溶剂，所述表面活性剂为吐温、磺化琥珀酸二辛酯钠、十二烷基磺酸钠、十六烷基三甲基氯化铵、聚氧乙烯脂肪酸醚中的一种或几种的混合物，助溶剂中的表面活性剂浓度为0.03-0.06mol/L。

所述步骤（1）中的助溶剂中的溶剂由乙醇、正丁醇、水组成，体积比为6:8:3。

所述步骤（3）中的高速逆流色谱溶剂系统选用正己烷-正丁醇-甲醇-水，体积比为5:3:4:3。

本发明的优点在于：本发明采用超临界二氧化碳萃取，高效快捷、易于控制、产品纯度高、环境污染小；本发明将表面活性剂加入到CO₂中，形成超临界CO₂反相微乳体系，提高了超临界CO₂对甾体皂苷成分的萃取率，可直接获得较高纯度的埃及槲果甾体皂苷萃取物；另外采用高速逆流色谱分离纯化甾体皂苷萃取物得到单体化合物，损失小、制备量大。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1：

    称取5kg埃及槲果种子粉碎，将粉末放入萃取罐中，配制0.03mol/L的吐温-乙醇-正丁醇-水溶液为助溶剂，泵入10L于萃取器中，在温度45℃，压力30MPa，CO₂流量为22kg/h条件下进行萃取，萃取时间为3h，然后采用二级分离，分离釜Ⅰ温度为42℃。压力为11MPa；分离釜Ⅱ温度为40℃。压力为6MPa，收集萃取物。将萃取物加水稀释，通过大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗至无醇味，再依次用20%乙醇和60%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，减压浓缩干燥，得到埃及槲果总甾体皂苷，总甾体皂苷的纯度为65.3%。将埃及槲果总甾体皂苷进行高速逆流色谱分离纯化，条件为：溶剂体系：正己烷-正丁醇-甲醇-水，体积比为5:3:4:3，转速为850rpm，流速为2.5ml/min，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相泵入色谱仪的螺旋管，待充满后开启速度控制器，泵入流动相，当两相平衡后将样品溶于流动相中，注入分离管路，紫外检测器检测，根据色谱图收集色谱峰组分，分离得到三个流分，将各流分分别浓缩、冷冻干燥，用60%乙醇重结晶得到高纯度的槲果素4、槲果素5、槲果素7。

实施例2：