[发明专利]紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖及其制备方法以及应用

说明书

技术领域

本发明涉及紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖GS-A-1、其制备方法及其在制备抗肿瘤药物及免疫调节药中的用途。

背景技术

肿瘤是当今世界直接危及人类生命的一种最常见、最严重的疾病，因而如何有效地预防和治疗肿瘤已成为医学领域研究的一个热点。传统的手术、放化疗方法在延长肿瘤患者生命的同时会产生内脏器官损伤、免疫功能抑制等副作用，使病人的生活质量明显下降。目前，真菌多糖因具有毒副作用小、安全性高、抑制肿瘤效果好等优点，常用于肿瘤的辅助治疗，其作为一种免疫增强剂辅助放疗、化疗，已成为肿瘤治疗的重要手段。

食药用真菌具有抗肿瘤抗病毒、降血脂、延缓衰老、护肝排毒、促进核酸和蛋白质生物合成等多种功效，在中国有悠久的使用历史。国内外大量研究表明，真菌多糖是从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离得到的，为真菌类药物的药效部位，是能够控制细胞分裂分化，调节细胞生长衰老的一类活性多糖。

紫芝(Ganoderma sinense)作为灵芝属真菌(2010版中国药典)，其有较明显的抗肿瘤、提高免疫力的功效。由于其制备工艺不明确，多糖含量较低(一般＜60％重量)。另外紫芝粗多糖组分复杂，主要药效部位和组分尚未阐明。此外由于紫芝子实体资源稀少，市场上少见紫芝产品。

紫芝粗多糖溶解度很差，粘度较大，颜色深，味重，成分复杂，分子量从几千到上千万，难找到合适的质量控制方法，而且活性成分不明确，构效关系和作用机制也无从考察。若能将粗多糖分离纯化从中得到活性均一多糖，不仅能提高药效水平，并且对质量控制、构效关系和作用机制考察有很大的帮助。

中国专利200710045369.4“一种紫芝发酵方法及制得的紫芝菌丝体”公开了一种紫芝液体深层发酵产生菌丝体的方法，该菌丝体用水提醇沉法提取得到的粗多糖含量在39～75％重量，其体内药理实验中，口服剂量为40mg/kg/天时有一定抗肿瘤活性。中国专利200710045368.x“紫芝菌丝体胞内多糖及其制备方法和应用”公开了一种从紫芝液体深层发酵产生的菌丝体中提取制备得到粗多糖的方法。该方法涉及的水提醇沉法提取得到粗多糖含量在39～75％重量。其药理实验的剂量也为40mg/kg/天(给药方式：口服喂药)。杨国红，杨义芳，金隽迪(紫芝液体深层发酵的抗肿瘤活性部位研究[J].中草药，2008，39(6)：877-880)对紫芝液体深层发酵的抗肿瘤活性多糖进行了研究，从紫芝菌丝体中提取得到胞内多糖，其药理实验的剂量也为40mg/kg/天(给药方式：口服喂药)。然而，以上专利申请和文章均未涉及具抗肿瘤活性的均一多糖的研究，而且粗多糖存在着多糖含量不高、给药剂量不优、活性成分不够明确和抗肿瘤作用机制无从考察等不足。寻找多糖含量高、给药剂量更优、活性成分明确单一的的抗肿瘤均一多糖无论对作用机制研究，还是在抗肿瘤药物中应用都具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种多糖含量高、可在制备抗肿瘤药物与免疫调节药物中应用的紫芝液体深层发酵菌丝体抗肿瘤均一多糖。

如本发明所使用，“液体深层发酵”是发酵工业上常用的一种发酵方法，它的培养基是液态的。

如本发明所使用，“菌丝体”是菌丝集合在一起构成一定的宏观结构。

如本发明所使用，“均一多糖”是单糖通过聚合而成的多糖，聚合的糖有特定的结构单元。均一多糖可分为相同单糖形成的聚糖和不同单糖形成的杂多糖。

本发明的第一个目的在于提供一种结构全新的紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖，将其命名为GS-A-1，其特征在于，所述均一多糖的总多糖含量为大于95％重量，优选为大于98.5％重量；且所述均一多糖GS-A-1的分子量为10000-30000道尔顿，优选为21190道尔顿。

根据本发明的一个优选的实施方式，经TLC(薄层色谱分析)和HPLC(高效液相色谱法)分析可以得知，所述均一多糖GS-A-1中的多糖主要由半乳糖和甘露糖组成，所述半乳糖、甘露糖的摩尔比为1.2-2.2∶1，优选1.7∶1。

进一步，经高碘酸氧化及Smith降解分析得知，所述均一多糖GS-A-1是由半乳糖和甘露糖通过(1→2)，(1→6)连接的杂聚多糖。

本发明的第二个目的在于提供上述紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖GS-A-1的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：紫芝液体深层发酵菌丝体经水提醇沉得到粗多糖，粗多糖经超滤、浓缩和柱层析，得到紫芝液体深层菌丝体均一多糖GS-A-1。

上述制备方法简单易行、生产周期短、成本较低廉。