[发明专利]一种基于表面等离子共振技术的食品中有害物质多残留同时检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种食品中有害物质多残留同时检测技术。特别是基于表面等离子体共振技术，通过核酸适配体与未标记、标记样品进行特异性竞争识别，采用多探头光纤传感器同时检测食品中多种有害物质的方法。

背景技术

食品中有害物质残留严重危害了公众身体健康，面对食品安全问题的重大挑战，分析检测食品中有害物质是保障食品安全的重要环节。其中，表面等离子共振（Surface Plasmon Resonance，SPR），作为一种超灵敏快速检测手段，是食品安全检测的理想工具之一。但SPR在检测低分子量物质时仍存在信噪比大、响应值小、灵敏度低等不足，而食品中啶虫脒、卡那霉素、土霉素（农药兽药）、赭曲霉素（生物毒素）、孔雀石绿（化学污染物）等均为低分子量有害物质。此外，食品中经常同时存在多种有害物质，使得检测过程复杂繁琐，目前普遍采用的单个物质检测已经无法满足要求。因此，迫切需要开发基于SPR技术的新型检测方法，实现食品中多种低分子量有害物质的超灵敏、快速、同时检测。

近几年来，基于适配体识别的检测方法在食品安全检测中呈现出巨大应用前景。适配体是能够与靶标分子高特异性结合的核酸（DNA或RNA）片段。由于适配体具有高特异性和高亲和性，因此被喻为“化学抗体”。跟抗体相比，适配体具有更高的化学稳定性，不易失活，因此更具应用潜力。此外，适配体制备不依赖动物或细胞，可通过聚合酶链反应（PCR）技术在体外大量合成。因此，基于适配体特异性识别，为同时检测食品中多种有害物质提供了基础和依据。结合表面等离子体共振技术，有望实现食品中多种有害物质的超灵敏同时检测。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种采用表面等离子体共振谱技术检测食品中多种低分子量有害物质残留的方法，解决现有表面等离子体共振技术中难以同时检测多种低分子量物质的问题。

本发明的技术方案为：一种应用表面等离子共振技术的食品中有害物质多残留同时检测方法，对同一样品中的多种有害物质残留组分的含量进行同时检测，其特征在于包括下述步骤：

（一）传感器表面适配体固定：选择链霉亲和素SA修饰的多探头光纤传感器，每个探头表面连接一种适配体，通过通入5-50μL浓度为1-50μg/L已标记生物素的残留组分对应核酸适配体，在多探头光纤传感器上固定上不同残留组分相应的核酸适配体；

（二）对待测残留组分进行分子探针标记，标记方法根据待测物基团不同，选择EDC/NHS法交联羧基与氨基或戊二醛法交联两个氨基；

（三）标准溶液配制：用0.01-0.1mol/L（pH＝7.4）的磷酸盐缓冲液配置残留组分的标准样品储备液，储备液浓度为0.1ng/mL至1mg/mL，分别等量量取残留组分的标准储备液，配制含有有害物质残留组分的混合标准原液，用磷酸盐缓冲液将混合标准原液配制成不同浓度的标准溶液，取不同浓度未标记待测残留组分的标准溶液和分子探针标记的待测残留组分充分混合；

（四）建立标准曲线：采用表面等离子共振谱仪测量，以0.02mol/L的磷酸盐缓冲液为测量基准，通过微泵通入5-100μL待测混合样品，随后通入5-100μL浓度为5-100ng/mL的分子探针的适配体溶液，记录下表面等离子体共振仪光谱图；取不同浓度待测样品的表面等离子体共振谱图稳定值，绘制工作曲线，并进行多项式曲线拟合，获得回归曲线的方程；依次测得多种有害物质残留组分的工作曲线，进行多项式曲线拟合，获得各自的标准曲线；

（五）定量检测：对于未知含量的多种残留组分样品进行检测，同样按照步骤（三）进行；再通入适量分子探针适配体溶液，采用表面等离子共振谱仪记录多种有害物质残留的光谱图；将光谱图中不同残留组分的稳定值代入相应的回归曲线方程，计算出不同食品中残留组分的浓度值；

（六）通入0.01-0.05mol/L（pH为2-3）的甘氨酸-盐酸缓冲溶液，冲洗多探头光纤传感器表面，进行传感元件再生，用于下次测量。

所述分子探针包括凝血酶或溶菌酶或免疫球蛋白E，标记方法包括EDC/NHS法或戊二醛法。

可以采用核酸适配体为识别分子，核酸适配体序列与待测物直接相关。

可以采用多探头光纤传感器为表面等离子共振仪的传感元件，每个探头连接一种适配体，总共连接4~16种不同的适配体。

所述步骤（一）传感器表面适配体固定，包括如下步骤：

（1）将链霉亲和素SA修饰的光纤传感探头插入表面等离子体共振检测仪中，在工作通道中进行在线传感表面修饰；