[发明专利]一种在酵母中制备重组胱抑素C的方法

权利要求书

1.一种在酵母中制备重组胱抑素C的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1).提供编码胱抑素C的核苷酸序列；

2).将上述核苷酸序列克隆到酵母表达载体中；

3).将上述载体转化至同一酵母宿主；

4).诱导上述酵母宿主表达C端带有组氨酸标签的胱抑素C；

5).纯化上述胱抑素C。

2.根据权利要求1所述的在酵母中制备重组胱抑素C的方法，其特征在于，步骤1)中的所述编码胱抑素C的核苷酸序列根据所用宿主的密码子偏好性来确定。

3.根据权利要求1所述的在酵母中制备重组胱抑素C的方法，其特征在于，步骤1)中的所述编码的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示。

4.根据权利要求1所述的在酵母中制备重组胱抑素C的方法，其特征在于，步骤2)中的所述酵母表达载体选自pPIC9K、pPIC3.5K、pPICZαA、pPICZαB、pPICZαC、pPICZA、pPICZB、pPICZC或pAO815之一。

5.根据权利要求1所述的在酵母中制备重组胱抑素C的方法，其特征在于，步骤3)中的所述酵母宿主选自汉逊酵母、毕赤酵母、假丝酵母或光滑球拟酵母之一。

6.根据权利要求1所述的在酵母中制备重组胱抑素C的方法，其特征在于，步骤4)中的所述组氨酸标签是含有6个连续的组氨酸的氨基酸序列。

7.根据权利要求1所述的在酵母中制备重组胱抑素C的方法，其特征在于，步骤4)中的所述诱导表达使用甲醇作为唯一碳源，并使甲醇的终浓度为体积比0.5％至3％。

8.根据权利要求1所述的在酵母中制备重组胱抑素C的方法，其特征在于，步骤5)中的纯化采用Ni²⁺-NTA基质进行，并采用咪唑溶液进行洗脱。