[发明专利]脊索瘤细胞株及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及脊索瘤细胞株及其用途，属于肿瘤生物学领域，更具体地，涉及一种人脑脊索瘤细胞系(BHC2)的建立及其用途。

背景技术

脊索瘤来源于脊索胚胎残余组织产生的原发性骨性肿瘤，是一种少见的慢性进展的恶性肿瘤，占全部原发恶性肿瘤的3％～4％，居原发性恶性骨肿瘤第4位。有约1/3起源于颅底部，其余可起源于脊柱、骶尾部或中线以外的位置。该肿瘤发展缓慢且具有恶性肿瘤的生长方式，常生长于斜坡骨质，部位深在，且常呈广泛性生长，部分还有分隔，并毗邻重要的血管和神经，彻底切除非常困难，而且该肿瘤对放、化疗不敏感，因此颅底脊索瘤治疗极其困难，复发率高且预后相对较差，中位生存期约为6年，10年生存率仅为40％，大约50-70％的患者无治而终，对患者及其家庭乃至社会都造成一定程度的危害。因此，开发更为有效的肿瘤治疗方案和治疗药物是非常重要的。

脊索瘤从组织形态学将其分为普通型脊索瘤、软骨样脊索瘤和低分化型脊索瘤。光镜下呈条索状排列的空泡细胞。脊索瘤的确诊依赖免疫组织化学染色。目前常用的标志蛋白有S-100、上皮细胞膜抗原(Epithelial Membrane Antigen，EMA)、细胞角蛋白(Cytokeratin，CK)以及vmientin蛋白。Vujovic等人对胚胎脊索组织、53例脊索瘤及其它323例肿瘤组织(包括163例软骨肿瘤)进行了Brachyury蛋白的免疫组化研究，发现胚胎脊索组织和所有脊索瘤细胞均Brachyury蛋白(+)，而所有其它肿瘤及正常组织均为(-)。这个研究表明脊索瘤组织中的软骨样细胞和脊索样细胞都是来源于脊索细胞，所以Brachyury蛋白可作为鉴别脊索组织及脊索组织来源的肿瘤特异性标志物。Schwab等人比较了6例经典脊索瘤和14例原发脊索肉瘤，发现Brachury和CD24只在脊索瘤中表达。Brachury是新近发现的一种脊索瘤相关分子标志物，其它的生物标志蛋白还有癌胚抗原(Carcino Embryonic Antigen，CEA)、半乳糖苷酶结合蛋白(Galenctin-3)、Fascin-1、生长因子类(Growth factors，GFs)、基质金属蛋白酶类(Matrix Metalloproteinase，MMPs)等。

脊索瘤细胞系是研究肿瘤生物学特性的重要工具，并且是研究抗肿瘤药物的有用工具。将来的治疗策略应该是靶向清除脊索瘤细胞，从而获得对肿瘤的有效治疗。开发靶向药物首先需要一个性质稳定的脊索瘤细胞系，以此脊索瘤细胞系为基础才可能研发出特异性靶向脊索瘤的药物，但目前这种细胞系国内尚未见报道。

发明内容

本发明要解决的第一个技术问题是提供一株能够在体外长期传代培养的、性质稳定的脊索瘤细胞系(BHC2)。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

人脑脊索瘤细胞系(BHC2)，其特征在于：所述细胞系在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC NO：5321。

所述的人脊索瘤细胞系，生物学特性为：细胞呈长梭型，贴壁生长，胞浆存在大量空泡。

所述的人脊索瘤细胞系，有Brachyury、S100、Galectin-3、Fascin-1多种脊索来源细胞特异性标志蛋白的表达。

所述细胞系的染色体为异倍体核型。

所述的人脊索瘤细胞系，该细胞周期各时相的细胞百分率分别G1期51.3％、S期23.6％、G2-M期25％、G2/G1≈2，表现出肿瘤细胞增殖特性。

本发明提供一种人脊索瘤细胞系，该人脊索瘤细胞系HBC2已于2011年9月29日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(其简称为CGMCC)，其保藏编号为CGMCC No.5321，建议的分类名为：人脊索瘤细胞。保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码100101。

本发明所述的人脑脊索瘤细胞系HBC2是发明人从颅底脑脊索瘤患者的肿瘤组织中分离培养获得，该细胞通过细胞因子依赖法和反复贴壁法筛选纯化后获得增殖能力很强的HBC2细胞，在体外经过超过14次的传代培养，细胞仍保持脊索肿瘤特性。该细胞具有脊索细胞的超微结构，并表达多种脊索来源组织的标志蛋白，同时也具有肿瘤特性和成瘤能力。

通过光学显微镜和电子显微镜方法证实，本发明所述的人脊索瘤细胞系在胞浆中存在特征性空泡结构。

通过免疫组织化学方法证实，本发明所述的人脊索瘤细胞系表达多种脊索来源组织的标志蛋白Brachyury、S100、Galectin-3、Fascin-1。