[发明专利]显微镜水镜观察活体在体小鼠眼组织所需水介质的构建方法

说明书

技术领域

本发明属于医学实验附属装置，尤其涉及一种显微镜水镜观察活体在体小鼠眼组织所需水介质的构建方法。

背景技术

借助荧光标记技术，显微镜下观察活细胞、活组织以至于活体动物在体组织成为可能。观察活体细胞和组织，并且想要得到比较高分辨率的图像必须借助双光子激光扫描显微镜水镜来完成，而水镜与观察目标之间必须用水作为介质才能实现观察的目的。对于活细胞或者活的离体组织，我们可以使用细胞槽、培养皿等盛装水介质。对于离体的眼球，使用水镜同样也可以用细胞槽、培养皿等盛装水介质。对于活体在体组织，如果待观察组织不突出于体表，可以盛装水介质，使用水镜也很方便。但是，对于明显突出于体表的眼组织的活体在体观察，既要必须使用水镜，水镜镜头与眼组织表面之间又必须要有水介质填充。问题是：眼睛是突出于体表的组织，虽然有眼裂这种生理性凹陷，但凹陷本身盛装的液体不能满足水镜观察样本的要求。这就需要有一种能盛装水介质的眼部装置，来帮助完成使用水镜的显微镜观察，而目前国内外没有现成的装置可以购买，也没有可效仿的方法可以应用。

国际上采用的一种方法是，用一种胶（唯地息，卡波姆滴眼液，一种人工泪液胶）替代水介质，但是，经我们前期应用，存在以下问题：1）和水做介质相比，成像质量差。由于水镜要求的介质是水，折射率是1.333，而这种胶是半流体，折射率是1.376，图像的成像质量远没有水做介质清晰。2）这种胶在接触镜头的部分极易干燥成固体状态，使成像模糊。甚至一个视野的Z序列扫描还没有完成，上部接触镜头的胶已经干燥了，致使整个立体图像的部分图像模糊。3）由于眼球是突出于体表的，而人工泪液胶是一种半流体物质，即使滴加很多胶，也难以长时间维持所要观察的整个眼球表面和水镜镜头之间完全有胶介质填充。

发明内容

本发明的目的是提供一种显微镜水镜观察活体小鼠眼组织所需水介质的构建方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种显微镜水镜观察活体在体小鼠眼组织所需水介质的构建方法，是：利用实验室常用塑料滴管制备盛装水介质的眼杯；眼杯外侧及底部均匀涂抹凝胶物质，将眼杯放置在小鼠眼球周围的皮毛上，用牙签挑取凝胶物质再在眼杯底部与皮毛结合部位补充涂抹，使之均匀全部涂抹严实；眼杯内添加水介质，即可进行水镜观察。

制备眼杯时，利用塑料滴管移行部位的自然喇叭形状，从直径4mm - 9mm的不同移行部位切取，形成眼杯的底端，向滴管头方向量取3-4mm作为眼杯高度，截取滴管，制成底端细上端粗的喇叭状无底塑料眼杯。

所述的凝胶物质为凡士林或者各种抗生素眼膏。

采用上述技术方案，可以在实验室内制作眼杯，取材容易，制作简单，使用方便，在小鼠眼部放置眼杯来盛装水介质，并且用凝胶物质紧密粘合眼杯和眼周围组织，使水介质不外漏，可以保证小鼠眼组织与镜头间的水介质满足观察的需要。

附图说明

图1为一次性塑料滴管的结构示意图。

图2为眼杯的结构示意图。

图3为眼杯放置状态示意图。

图4为用自制眼杯构建的水介质进行水镜观察的示意图。

具体实施方式

根据实验动物眼球大小，自制一个直径合适的底窄顶宽的喇叭形无底眼杯。眼杯的具体制作方法：取一个一次性塑料滴管，如图1所示，图中1是滴管头，3是滴管体，利用滴管移行部位2的自然喇叭形状，用刀片截取移行部位的滴管制成眼杯。根据不同动物眼球大小，从直径4mm - 9mm的不同移行部位切取，形成眼杯的底端，向滴管头方向量取3-4mm作为眼杯高度，截取滴管，底端细上端粗的喇叭状无底塑料眼杯形成，如图2所示，图中4为上切线，5为下切线，6为眼杯顶，7为眼杯底。

这样制作眼杯的优点是：1）取材容易。本眼杯采用一般实验室易得的材料，不需要购买昂贵的专用材料。2）制作简单。本眼杯可以在实验过程中快捷地制作，整个制作过程仅1-2分钟即可完成。3）一次性使用，使用方便。4）本眼杯可以根据不同动物、不同年龄眼球大小以及个体动物特征，根据不同实验制作个性化眼杯。

将小鼠麻醉后，固定，眼球朝上。眼杯外侧及底部均匀涂抹凡士林或者各种抗生素眼膏等凝胶物质，选择好眼杯放置部位，将眼杯放置在小鼠眼球周围的皮毛上，用牙签挑取凝胶物质再在眼杯底部与皮毛结合部位补充涂抹，使之均匀全部涂抹严实，如图3所示，图中8为皮肤，9为凝胶物质，10为眼裂，11为眼球。如图4所示，眼杯内添加水介质13，即可用显微镜水镜12进行观察。

小鼠包括各种医学常用小鼠模型，如C57、BALB/C或者昆明白等。

眼杯内添加的水介质根据实验要求，可以是生理盐水、平衡盐溶液或者带有荧光染料的液体。