[发明专利]志贺样毒素Stx1B口服疫苗的制备方法及其产品

权利要求书

1.志贺样毒素Stx1B口服疫苗的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

（1）克隆志贺样毒素Stx1B基因

根据大肠杆菌O157 ：H7志贺样毒素Stx1B基因序列设计上游引物和下游引物，再提取大肠杆菌O157 ：H7基因组DNA，并以提取的基因组DNA为模板，用设计的上游引物和下游引物进行PCR扩增，得志贺样毒素Stx1B基因；

（2）构建含Stx1B基因的重组表达载体

将步骤（1）所得的志贺样毒素Stx1B基因进行酶切，并将志贺样毒素Stx1B基因连入经同样酶切的双元表达载体，得含Stx1B基因的重组表达载体；

（3）制备志贺样毒素Stx1B口服疫苗

将步骤（2）所得重组表达载体转化农杆菌，得含重组表达载体的农杆菌，将制得的含重组表达载体的农杆菌用于转化植物细胞，经诱导，筛选，鉴定，得转基植株，收集转基因植株，干燥，粉碎，得志贺样毒素Stx1B口服疫苗。

2.根据权利要求1所述的志贺样毒素Stx1B口服疫苗的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，所述上游引物核酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物核酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1所述的志贺样毒素Stx1B口服疫苗的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）是用限制性内切酶BamH I和SacⅠ酶切步骤（1）所得志贺样毒素Stx1B基因，同时用BamH I和SacⅠ酶切双元表达载体，将回收的Stx1B基因与酶切后的双元表达载体连接。

4.根据权利要求3所述的志贺样毒素Stx1B口服疫苗的制备方法，其特征在于：所述双元载体为改良pCAMBA1301载体。

5.根据权利要求1-4任一项所述的志贺样毒素Stx1B口服疫苗的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中，所述农杆菌为EHA105。

6.根据权利要求5所述的志贺样毒素Stx1B口服疫苗的制备方法，其特征在于：所述植物细胞为烟草细胞。

7.由权利要求1-6任一项所述制备方法制得的志贺样毒素Stx1B口服疫苗。