[发明专利]用于测定HE4a的组合物和方法

说明书

本发明包括用于疑似患有和/或罹患卵巢癌的受试者的检测、诊断、分级、分期、预后以及预测和监测所述受试者的治疗应答性的组合物和方法。也公开了通过确定全长HE4a在得自患者的样品中的存在来检测卵巢癌的免疫测定、结合剂和抗体和方法。

背景技术

WFDC2(HE4/HE4a)基因产物是稳定的4-二硫键核心蛋白家族的一个成员。HE4是一种首先在人附睾组织中观察到的分泌型糖基化蛋白(人附睾蛋白4;HE4)，且在某些癌症（包括卵巢癌）中过表达。HE4/HE4a蛋白和核酸的表征已经被报道在，例如，Kirchhoff C,Habben I,Ivell R,Krull N(Mar1992).“A major human epididymis-specific cDNA encodes a protein with sequence homology to extracellular proteinase inhibitors”.Biol Reprod45(2):350–7Schummer M,Ng WV,Bumgarner RE,Nelson PS,Schummer B,Bednarski DW,Hassell L,Baldwin RL,Karlan BY,Hood L(Dec1999).“Comparative hybridization of an array of 21,500ovarian cDNAs for the discovery of genes overexpressed in ovarian carcinomas”.Gene238(2):375–85;Kirchhoff C(1998).“Molecular characterization of epididymal proteins.”Rev.Reprod.3(2):86–95.;Kirchhoff C,Osterhoff C,Habben I,等人.(1990).“Cloning and analysis of mRNAs expressed specifically in the human epididymis.”Int.J.Androl.13(2):155–67;I,等人;Cancer Res.2003Jul1;63(13):3695-700。HE4/HE4a在癌细胞中的过表达提示，该蛋白和它的各种异形体可以作为用于检测癌症和用于鉴别具有增加的罹患癌症的可能性的患者的有用生物标志物。以前已经报道了与例如HE4/HE4a等分子标志物的应用有关的方法和组合物，包括US7270960、US20100311099、US20080020473、US20070286865、US20100047818、US20090104684和US20030108965，它们中的每一篇的内容整体并入本文中。

已经报道，由于选择性剪接以及不同糖基化模式所导致的不同糖型，HE4/HE4a蛋白具有不同的异形体。考虑到上述内容，本领域需要能够检测生物标志物例如HE4a、它们的变体、剪接异形体和糖型的过表达来诊断癌症的组合物和结合剂(例如抗体)。

发明内容

本发明包括用于诊断受试者的卵巢癌和用于鉴别具有增加的罹患卵巢癌的可能性的受试者的组合物和方法。所述组合物包括特异性地结合在卵巢癌上过表达的HE4/HE4a的可溶性形式和细胞表面形式的单克隆抗体、它们的变体和片段。还提供了具有公开的HE4a抗体的结合特征的单克隆抗体。还公开了生产HE4/HE4a单克隆抗体的杂交瘤细胞系。公开的组合物可以用于诊断方法中以及用于鉴别具有增加的罹患卵巢癌的可能性的受试者的筛选方法中。具体地，诊断方法可以包括免疫组织化学(IHC)测定或双夹心ELISA测定。还提供了试剂盒，其包括一种或多种公开的HE4a单克隆抗体，并用于实现本发明的方法。还公开了包含HE4a表位的氨基酸序列的多肽和在抗体的生产中使用这些多肽的方法。

附图说明

图1解释了包含HE4a结构域和人/小鼠IgG的一个示例性的HE4a融合蛋白实施方案。

图2解释了单克隆抗体实施方案(12A2和14E2抗体)对全长HE4a、HE4a的HE4a-V4和HE4a-V2结构域的一些结合特异性。在该实施例中，MAb12A2和14E2与HE4a-V4变体和与全长HE4a结合，但是不与HE4a-V2结构域结合。这表明，12A2和14E2MAb与HE4a N-WFDC结构域结合。