[发明专利]灭活的脊髓灰质炎疫苗

说明书

发明领域

本发明涉及灭活的脊髓灰质炎疫苗。具体地，本发明涉及灭活的脊髓灰质炎疫苗、用于生产灭活的脊髓灰质炎疫苗的减毒的脊髓灰质炎病毒、及此灭活的脊髓灰质炎疫苗的制备。

发明背景

世界卫生组织(WHO)的全球根除脊髓灰质炎的倡议已经取得巨大进步。用于所述计划的主要工具是活的减毒的口服脊髓灰质炎疫苗。多年来已知此活的减毒疫苗在小部分接受者或它们的接触者中造成疫苗相关性脊髓灰质炎，且最近能够回复到感染性表型，造成在世界上因脊髓灰质炎已经消失，疫苗计划已经变得不那么有力的一些地方爆发。一些免疫缺陷患者长期排泄源自疫苗的脊髓灰质炎病毒已被很好的记载。因此，口服脊髓灰质炎疫苗的使用及其改变其表型的能力是在世界范围内根除脊髓灰质炎的问题。

认为已经分离到最后的野生型病毒就立即停止接种疫苗将极其不明智，因为在一些地区，由于薄弱的监测，野生型病毒可在未被检测到的情况下流通。同样，免疫缺陷个体在接种疫苗后的非常长的时间内可持续排泄病毒且可以是再次出现的来源。此外，可能仍然存在由来自其最后一轮使用的口服疫苗造成的爆发。

因此，接种疫苗及监测在宣告根除野生型病毒后必须继续一段时间。这要求在实验室中使用监测和疫苗生产中采用的脊髓灰质炎病毒，其将首先关注由Salk研制的灭活的脊髓灰质炎疫苗(IPV)的种类的制造。

Salk疫苗是基于三种野生的、脊髓灰质炎病毒的剧毒野生型毒株即Mahoney(1型脊髓灰质炎病毒)、MEF-1(2型脊髓灰质炎病毒)、及Saukett(3型脊髓灰质炎病毒)毒株，离体生长在Vero细胞中(Wood等人，Biologicals 25：59-64，1997)。野生型脊髓灰质炎病毒随后用福尔马林灭活以生产IPV。当前用于IPV生产的野生型毒株是已知在人类中是致瘫痪的且被以大量用于IPV生产。这呈现严重的防护问题，其可能不容易与IPV所要求的生产规模协调。对在灭活的疫苗制造中使用与所述口服疫苗使用的相同的毒株已表达出一些兴趣，由于它们被减毒且因此呈现它们将逃脱的较少的风险。然而，它们在人类中复制的不稳定性意味着它们仍然危险，且它们的免疫原性特性与目前使用的野生型毒株的免疫原性特性是不同的，以致将需要一个大的临床开发计划以开发基于这些毒株的IPV。

由Sabin于20世纪50年代采用本质上经验程序开发的活减毒的脊髓灰质炎疫苗已被在世界范围内用作口服的活脊髓灰质炎疫苗。在过去的几年中，科学家已采用多种分子生物学技术以试图说明这些疫苗毒株的神经毒力降低的机制。大部分的研究集中在血清型1和3上。对于这两种血清型，已比较疫苗毒株的完整的核苷酸序列与它们的神经毒性前身株(progenitor)的核苷酸序列。就1型脊髓灰质炎病毒来说，疫苗毒株与其前身株在7441个碱基的基因组中有47处不同(Nomoto等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 79：5793-5797，1982)。关于3型脊髓灰质炎病毒类似的研究显示，在疫苗和其前身毒株之间的7432个碱基的基因组中只有10个核苷酸序列差异(Stanway等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：1539-1543，1984)。

2型毒株从自然减毒的亲本发展而来，但是分析分离自疫苗相关的脊髓灰质炎的病例的神经毒性的回复毒株，鉴定了与Sabin 2有17种不同(Pollard等人，J.Virol.63：4949-4951，1989)。

先前已经提出脊髓灰质炎病毒3型毒株基因组的5′非翻译区的二级结构模型(Skinner等人，J.Mol.Biol.207：379-392，1989)。对于结构域V(核苷酸471-538)，在471-473及477-483处的碱基与在538-536及534-528处的碱基分别配对如下：

    471      477 483

…  UCC  …  CCAUGGA  …

…  AGG  …  GGUGCCU  …

    538      534 528