[发明专利]纤丝病毒融合蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及纤丝病毒（Filovirus）糖蛋白融合蛋白在预防和诊断纤丝病毒感染中的应用。

技术背景

埃博拉病毒(EBOV)和马尔堡病毒(MARV)是纤丝病毒科（Filoviridae）的成员，纤丝病毒科是分类为“A类”生物战剂的病毒家族，造成人和非人灵长动物中严重的出血热，发病率和死亡率高达90%(Sanchez等,Filoviridae:Marburg and Ebola viruses（纤丝病毒科：马尔堡和埃博拉病毒）,第1409-1448页，收录于D.M.Knipe,P.M.Howley,D.E.Griffin,M.A.Martin,R.A.Lamb,B.Roizman和S.E.Straus(编)，Fields Virology（《费氏病毒学》），第5版，宾夕法尼亚州费城的利平科特威廉斯和威尔金斯出版公司（Lippincott Williams&Wilkins）2007)。4–10天的短培养期后，纤丝病毒感染个体突然发生与很多其他病毒感染相同的症状，包含发热、发冷、不适和肌痛。MARV在抗原性上稳定并仅存在一个种类，而EBOV更加可变并有五个种类。最近在2007年末在乌干达爆发了本迪布焦(Bundibugyo)EBOV(Towner等，PLoS Pathog2008年11月;4(11):e1000212)，相较扎伊尔（Zaire）、苏丹（Sudan）或莱斯顿（Reston）的EBOV种，其与象牙海岸（Ivory Coast）种更加接近。扎伊尔EBOV(ZEBOV)通常与最高致死率相关联。非洲爆发和近期猪中EBOV爆发数目的增加(Normile Science2009年1月23日;323(5913):451)，引起了牲畜可以把致死疾病传递给人的关注，这突出了开发疫苗和包含爆发在内的快速诊断测试的紧迫性。基于纤丝病毒糖蛋白(GP)的疫苗处于临床前和临床评价中，并且当前没有治疗剂来治疗纤丝病毒感染。由于对安全和有效的纤丝病毒疫苗的许可能需要数年，诊断和隔离感染的个体是当前限制爆发的主要方法。

当前开发了数个纤丝病毒疫苗候选，包含表达EBOV GP的重组腺病毒(Sullivan等,PLoS Med2006年6月;3(6):e177;Sullivan等,Nature2003年8月7日;424(6949):681-4;和Sullivan等,Nature2000年11月30日;408(6812):605-9)、重组副流感病毒(Bukreyev等,J Virol2007年6月;81(12):6379-88)、重组委内瑞拉马脑炎病毒(Pushko等,Vaccine2000年8月15日;19(1):142-53)、重组复制型(Feldmann等,PLoS Pathog2007年1月;3(1):e2和Jones等,Nat Med2005年7月;11(7):786-90)和重组复制缺陷型(Halfmann等,J Virol2009年4月;83(8):3810-5)水泡性口炎病毒、和载有纤丝病毒GP的病毒样颗粒(Warfield等,Proc Natl Acad Sci U S A2003年12月23日;100(26):15889-94和Warfield等,J Infect Dis2007年11月15日;196增刊2:S430-7)。使用杆状病毒表达纤丝病毒GP的起始研究显示部分保护，可以对昆虫细胞中糖基化特性和GP的加工起作用(Mellquist-Riemenschneider等,Virus Res2003年4月;92(2):187-93)。

尽管在这方面有进步，还需要开发针对纤丝病毒感染的新疫苗。本发明解决了这些和其它需求。

发明内容

本发明提供了包含纤丝病毒糖蛋白片段和免疫球蛋白多肽片段的融合蛋白。在典型的实施方式中，所述纤丝病毒糖蛋白片段是例如来自埃博拉病毒（特别是扎伊尔埃博拉病毒Mayinga株）的胞外结构域。所述免疫球蛋白多肽片段能是IgG1的免疫球蛋白重链恒定区多肽(即Fc片段)。在一些实施方式中，所述融合蛋白还包含纤丝病毒糖蛋白片段和免疫球蛋白多肽片段之间的接头。本发明的示例性融合蛋白是由没有接头的SEQ ID NO:1和有FLAG标签接头的SEQ ID NO:3所示的核酸序列编码。

本发明还提供包含本发明融合蛋白的免疫原性组合物。所述免疫原性组合物还可以包含佐剂。

也提供了包含本发明融合蛋白编码核酸序列的核酸载体。示例性核酸序列示于SEQ ID NO:1。