[发明专利]分离和纯化核酸的色谱设备和方法

权利要求书

1.一种通过凝胶过滤色谱从污染物中分离和纯化核酸的色谱设备，所述核酸优选包括DNA，尤其是基因组DNA，所述方法包括至少一种色谱单元，所述单元包括：

1.具有入口(2)和出口(3)的中空体(1)，所述中空体(1)包括固体基质(4)，优选形成凝胶床，

2.置于所述出口(3)和所述固体基质(4)之间的多孔玻璃料、滤器、毛网或膜(5)，其将所述固体基质留在色谱单元内，优选允许任何尺寸的核酸穿过，

3.位于多孔玻璃料、滤器、毛网或膜(5)与基质(4)之间的无孔环(6)，所述无孔环密封所述玻璃料、滤器、毛网或膜(5)的外部区域，以阻止移动相进入所述玻璃料(5)而不穿过基质(4)，

4.任选至少一种可移除闭合装置(7)，所述闭合装置密封所述色谱单元的入口(2)和/或出口(3)，和

5.任选至少一种收集管，所述收集管收集穿过所述基质(4)的移动相（洗脱液），

其中所述固体基质是尺寸排阻限度为150-500bp的凝胶形成聚合物，优选200-400bp和最优选250-300bp。

2.如权利要求1所述的设备，其特征在于，所述凝胶形成聚合物选自下组：葡聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺或其混合物，优选为葡聚糖和聚丙烯酰胺的混合物。

3.如权利要求1或2所述的设备，其特征在于，所述可移除闭合装置是选自下组的一次性闭合装置：盖箔、封条和可脱离末端，或者选自下组的可重新紧闭的闭合装置：螺帽和搭锁帽。

4.如权利要求1-3中任一项所述的设备，其特征在于，所述色谱单元的入口和出口用可移除闭合装置密封，且所述固体基质以预溶胀在溶剂中的凝胶形式提供，所述溶剂选自水、有机溶剂与水的均相混合物，或者水性缓冲液，其中所述溶剂在临使用前通过离心(预离心)从色谱单元中排除，并同时建立基质（床）。

5.如权利要求1-4中任一项所述的设备，其特征在于，所述设备还包括平行形式的多个不同色谱单元，这些色谱单元优选是多孔板的形式，其中多孔板的各孔含有一个单独的色谱单元。

6.一种用权利要求1-5中任一项所述的设备通过凝胶过滤色谱纯化核酸的方法，所述核酸优选包括DNA，尤其是基因组DNA，所述方法包括步骤：

1.提供待纯化的含核酸的样品，其中所述样品为液体优选水性洗脱剂中溶液或悬液的形式，

2.在所述色谱单元中建立基质，优选通过离心（预离心），

3.将该样品应用于所述基质上表面，

4.优选通过离心从所述色谱单元中洗脱所述核酸，并同时收集所述洗脱液。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述样品是获自生物样品的裂解物，优选获自选自下组的含细胞生物样品：新鲜和冷冻的组织、血液、其他体液和革兰氏阴性菌。

8.如权利要求6或7所述的方法，其特征在于，通过将所述装置在500～900x g离心1～7分钟进行，优选在700x g离心2~5分钟，且最优选在700xg离心3分钟而实施所述预离心步骤。

9.如权利要求6-8中任一项所述的方法，其特征在于，每色谱单元内基质床的体积为100μL～2mL范围，优选500μL～1mL范围，且最优选700～800μL。

10.如权利要求6-9中任一项所述的方法，其特征在于，所述每600μL-800μl基质床的样品体积范围为10-100μL。

11.如权利要求6-10中任一项所述的方法，其特征在于，通过将所述装置在500～900x g离心1～7分钟进行，优选在700x g离心2~5分钟，且最优选在700x g离心3分钟而实施所述从色谱单元中洗脱核酸的步骤。

12.如权利要求6-11中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品是通过在先的裂解过程获得的含细胞生物样品的裂解物，所述过程包括步骤：

1.混合所述含细胞样品和裂解缓冲液，

2.孵育所述混合物以获得至少含DNA、RNA和蛋白的裂解物，

3.任选分解裂解物中含有的RNA，

4.任选选择性沉淀除DNA以外的溶质。