[发明专利]血小板检测用微芯片及使用该微芯片的血小板检测装置

说明书

技术领域

本发明涉及一种使用微量血液检测血液中血小板功能的微芯片及使用该微芯片的检测装置。

背景技术

（血小板凝集检测的现有技术存在的问题）

血小板的活化及凝集在动脉中的血栓形成（白色血栓）或初期止血中发挥着关键作用。

当血管受损时，血小板与血管内皮细胞下存在的胶原蛋白直接和间接地结合。在血流缓慢的环境下（低剪切应力下），它们的结合主要是经由诸如GPVI等胶原蛋白受体的直接结合；而在血流快速的环境下（高剪切应力下），vWF与胶原蛋白结合，并且血小板的GPIbα受体与vWF结合，从而导致血小板与胶原蛋白的间接结合。与胶原蛋白的直接和间接相互作用使血小板活化，并且通过这种刺激，从致密颗粒和α-颗粒释放诸如ADP和血清素等各种血小板活化物质。

上述释放出的血小板活化因子可使血小板自身和周围的血小板活化。受到活化的血小板使纤维蛋白原受体GPIIb、IIIa经历活化型的结构变化，使血小板对于纤维蛋白原变为高亲和型。通过二聚体纤维蛋白原，活化的血小板彼此顺次交联，形成血小板凝集。

但是，目前测定血小板凝集的装置多数为测定通过大量血小板活化试剂的刺激使血小板活化和凝集过程的方法（非专利文献1）。

因此，在与生理性血小板活化条件很不相同的环境下诱发血小板活化反应，可测定各种受体的先天性功能异常等明显的功能差异，但是测定更多的生理性的血小板功能却很困难。

PFA-100（血小板功能分析仪：非专利文献2）是测定孔堵塞的系统，所述孔堵塞是通过与固定化的胶原蛋白接触、剪切应力、与血小板诱导物质接触而引起综合性的血小板活化的孔堵塞。与目前单独的由血小板活化诱导物质的刺激引起的血小板凝集相比，这是一种更接近生理性环境的测定系统。但是，无法调节数据波动以及经过孔的血液中含有的诱导物质的浓度，因此，无法适宜地测定血栓症发病引起的血小板已被活化的患者中发现的血小板活化诱导物质浓度非常低或不存在的情况下诱导的血小板凝集，以及血小板功能异常患者中测定血小板功能的情况下由极高浓度的血小板诱导物质刺激引起的血小板凝集能力。

此外，专利文献1中公开了一种测量血小板功能的方法，其特征在于，使血液经过毛细管内部，然后经过分隔件的开口部；随后，测定血栓形成堵塞开口部所需的时间。在该方法中，加入大量血小板活化试剂，在生物体内血小板被活化而使血小板数量减少的情况或血小板数量正常但血小板功能弱的情况等情况下，很难测定反映生物体状况的详细的血小板功能。

专利文献

专利文献1：特开2007-298511号公报

非专利文献

非专利文献1：血小板凝集能検査（血小板凝集能力检测），Thrombosis and Circulation,vol.12,No.4,p17-20,2004

非专利文献2：PFA-100による血小板凝集能測定（由PFA-100P测定血小板凝集能力），Thrombosis and Circulation,vol.13,No.3,p90-94,2005

发明内容

例如，败血症、弥散性血管内凝血综合征（DIC）等疾病中，由于血管内皮紊乱和血栓形成，血小板处于被活化的状态，进一步地，还形成血小板与白细胞的复合体等。此外，持续的血栓形成引起血小板显著被消耗，尽管生物体内有血栓形成，但同时还有出血症状。

目前的血小板功能检验中，难以进行严格反映这种症状的检测。

例如，在浊度法中，即使血小板数量减少，如果对于血小板诱导物质的反应性依然亢进，则判断血小板功能亢进（增强）。此外，对于生物体内的炎症反应等形成的血栓形成有较大影响的血小板-白细胞复合体在用于制成富含血小板的血浆进行离心分离时与红细胞共同沉淀，因此，在富含血小板的血浆中不含有该成分。

此外，在使用PFA-100的情况下，由于无论血小板功能强的患者还是血小板功能弱的患者均在相同浓度的诱导物质下进行测定，因此，无法适当地进行检测以确认在没有诱导物质或诱导物质含量很少的状态下引起的自然凝集诱导或确认对于给予抗血小板药物的患者中在诱导物质浓度非常高的情况下该药物的效果。此外，即使通过PFA-100测定时堵塞时间延长的情况下，也难以进行血小板功能弱的情况和血小板功能亢进（生物体内受到活化）但血小板数量少的情况之间的数据比较等。

鉴于上述情况，本发明的课题是提供一种在与血流同等环境下，使用微量血液可高效、正确地评价血小板功能的装置和方法。